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詳細(xì)介紹
ERseeing ＜Endoplasmic Reticulum Green＞
對(duì)活細(xì)胞影響少，適用于長(zhǎng)時(shí)間成像的ER染色試劑
本產(chǎn)品是活細(xì)胞成像用的不可逆ER染色試劑。與傳統(tǒng)的熒光標(biāo)記Glibenclamide系ER染色試劑相比，對(duì)細(xì)胞功能的藥理作用小，由于其不可逆性，更換培養(yǎng)基后也可進(jìn)行觀察。
※ 本產(chǎn)品是funakoshi基于京都大學(xué)工學(xué)研究科浜地格教授·田村朋則講師的研究成果商品化的產(chǎn)品。
※ 本產(chǎn)品僅供研究使用。
◆現(xiàn)有ER染色試劑的問(wèn)題點(diǎn)以及ERseeing的優(yōu)勢(shì)
過(guò)去通用的ER染色試劑是將熒光染料附著于在ER中特異表達(dá)的K+ 通道拮抗劑Glibenclamide上，并廣泛用于ER的可視化。然而，由于以下的問(wèn)題，應(yīng)用范圍有限。
● 由于Glibenclamide的藥理效果，通道活性被抑制，對(duì)細(xì)胞的影響大。
● 由于是可逆的拮抗劑，因此通過(guò)培養(yǎng)基交換等的清洗操作非常容易去除。
與之相對(duì)的，ERseeing是一種新型ER染色試劑，具有與Rhodol綠色熒光染料相連的蛋白標(biāo)記基團(tuán)，對(duì)ER膜成分具有很高的親和力。通過(guò)選擇性地集中在ER上并用熒光基團(tuán)標(biāo)記ER蛋白，可以進(jìn)行不可逆的染色。由于是不可逆的染色，染色后可更換含有FBS的培養(yǎng)基，因此可應(yīng)用于任何的培養(yǎng)基和試劑處理環(huán)境下的長(zhǎng)期成像。
傳統(tǒng)產(chǎn)品 | 本產(chǎn)品 | |
原理 | 在ER中發(fā)現(xiàn)的ATP敏感性鉀離子通道中 的特異性配體Glibenclamide用熒光標(biāo)記 后，在與受體結(jié)合時(shí)實(shí)現(xiàn)可視化。 | 將蛋白標(biāo)記基團(tuán)添加到Rhodol綠色熒光染 料中，其對(duì)ER膜成分具有很高的親和力。 通過(guò)對(duì)ER上的蛋白質(zhì)進(jìn)行熒光標(biāo)記實(shí)現(xiàn)可 視化。 |
對(duì)細(xì)胞的影響 | 由于Glibenclamide的藥理效果會(huì)抑制鉀 離子通道，影響細(xì)胞功能。此外，由于依 賴鉀離子通道表達(dá)量，有些細(xì)胞可能無(wú)法 染色。 | 不顯示藥理效果，對(duì)細(xì)胞功能幾乎沒(méi)有 影響。 |
不清洗觀察活細(xì)胞 | 良好 | 良好 |
清洗后觀察活細(xì)胞 | 靈敏度低 | 良好 |
染色后固定 | 可以，但是存在部分染色靈敏度低的可能性 | 良好 |
◆原著論文
Fujisawa et al., J. Am. Chem. Soc., 140, 17060～17070 (2018). Chemical Profiling of the Endoplasmic Reticulum Proteome Using Designer Labeling Reagents.
◆特點(diǎn)
● 激發(fā)/熒光波長(zhǎng)：509 nm/524 nm
※ 可利用一般的綠色·色素FTIC的觀察條件
● 與傳統(tǒng)的熒光標(biāo)記Glibenclamide系染色試劑相比，可以很好地抑制對(duì)細(xì)胞的影響。
● 即使培養(yǎng)基中含有ERseeing也可以進(jìn)行觀察。
※ 如果在培養(yǎng)基中長(zhǎng)時(shí)間染色的話，或許會(huì)出現(xiàn)色素呈油滴狀聚集等非特異性染色的情況。若想提高特異性，建議清洗后再觀察。
● 由于是不可逆性染色，染色后可更換培養(yǎng)基。染色后可在含有FBS培養(yǎng)基等的任意培養(yǎng)基中成像。
● 活細(xì)胞染色后，也可固定后觀察。還可以與免疫染色法組合使用。
※ 本試劑不適用于固定后細(xì)胞的染色。染色請(qǐng)使用活細(xì)胞。
◆應(yīng)用實(shí)例
■ ERM的激發(fā)·熒光光譜
激發(fā)光譜（藍(lán)）和熒光光譜（綠）
※ 適用于一般綠色熒光色素FTIC觀察條件
■ 驗(yàn)證ER特異性
通過(guò)與各種細(xì)胞器標(biāo)記共染色評(píng)價(jià)本試劑的ER特異性。觀察到ERseeing（100 nM）與現(xiàn)有的Glibenclamide系ER染色試劑高度共定位（Pearson相關(guān)系數(shù)>0.9）。另一方面，未觀察到與溶酶體標(biāo)記和線粒體標(biāo)記的共定位。高爾基體標(biāo)記觀察到部分共定位，可能是本試劑標(biāo)記的蛋白通過(guò)高爾基體轉(zhuǎn)運(yùn)，從ER轉(zhuǎn)移至分泌途徑。然而，添加ER-Golgi轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑的話會(huì)減少與高爾基體的共定位。（詳情請(qǐng)參考原著論文）
■ 評(píng)價(jià)細(xì)胞內(nèi)滯留性
向無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的HeLa細(xì)胞內(nèi)添加ERseeing以及傳統(tǒng)的熒光標(biāo)記Glibenclamide，染色15 min后進(jìn)行觀察（左）。然后，更換含有10%FBS的培養(yǎng)基再次觀察。熒光標(biāo)記Glibenclamide在清洗后熒光信號(hào)明顯消失了，但是由于ERseeing是不可逆染色的，清洗后也能觀察到很強(qiáng)的熒光信號(hào)。使用ERseeing進(jìn)行ER染色后，可以在含F(xiàn)BS的培養(yǎng)基中培養(yǎng)并進(jìn)行各種成像。
◆產(chǎn)品列表
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| FDV-0038 | ERseeing <Endoplasmic Reticulum Green> | 10 nmol |
?ERseeing ＜Endoplasmic Reticulum Green＞