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胎鼠海馬神經(jīng)元的原代培養(yǎng)

2021-11-19 閱讀(3679)

一、背景

     海馬是大腦顳葉內(nèi)側(cè)的一個解剖結(jié)構(gòu),因為形狀類似海馬稱為海馬體。海馬體的主要組成基本單位是神經(jīng)元,海馬神經(jīng)元的生理功能與人的記憶密切相關(guān)。一些疾病會使海馬神經(jīng)元出現(xiàn)損傷,比如常見的阿爾茲海默病、單純皰疹病毒性腦炎、自身免疫性腦炎等等,如果這些疾病出現(xiàn),就會導(dǎo)致記憶障礙,甚至癡呆的表現(xiàn)。

     神經(jīng)細(xì)胞是近代神經(jīng)學(xué)科中研究重點之一,神經(jīng)細(xì)胞體外培養(yǎng)是指在體外模擬建立體內(nèi)生長條件,使神經(jīng)細(xì)胞或神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞在其生存和生長并維持其形態(tài)和功能的方法。神經(jīng)細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù)已成為當(dāng)今神經(jīng)科學(xué)研究中的主要方法之一,與各種先進的技術(shù)結(jié)合在一起滲透到各個學(xué)科,但因神經(jīng)細(xì)胞對體外培養(yǎng)條件要求條件較高難度大而又制約它的發(fā)展。

二、實驗步驟
1.無菌條件下,從懷孕18天的SD大鼠腹中取出胎鼠,放在預(yù)冷的無鈣、鎂的HBSS平衡鹽溶液中;                          
2.解剖顯微鏡下,看清海馬結(jié)構(gòu),剝?nèi)ズqR上面的腦膜和血管;
3.加入0.05%胰酶-EDTA 消化液后放入 37℃孵箱內(nèi)消化15分鐘,每5分鐘搖晃一次;
4.HBSS溶液洗三次;
5.在HBSS溶液中吹打10次左右,吹打過程中不能有氣泡;
6.所收集的上清過濾后,將細(xì)胞懸液于4℃1000rpm離心10min ,棄上清,管內(nèi)加入種植液1重懸;
7.臺盼藍染色計數(shù),以 3 x 104cells/孔種入包被的24孔板,37℃,5%CO2,95%飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。4-6小時后,全量換種植液2;
8.每周換液兩次,每次半量換液。





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