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上海申知心生物科技有限公司
主營產品： 高血脂癥動物模型,心血管疾病動物模型,缺血性心臟病動物模型 |
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質粒提取
質粒提取時應該注意：1、搖菌時間:過液培養(yǎng)是一個普遍接受的概念，而且適合大部分情況。如果出現(xiàn)了問題，調整培養(yǎng)時間會有幫助：Nick 多，則增加培養(yǎng)時間；酶切出現(xiàn)問題，則減少培養(yǎng)時間。
2、起始菌體量:大家習慣說“從多少 ml 菌液中抽提質粒"，但要養(yǎng)成每次都觀察菌體量的習慣，因為質粒畢竟是在菌體中，而且，抽提質粒所用的試劑量，都只與菌體量有關。
3、菌體的懸浮:如果沒有懸浮菌體，則殘留的菌體團塊在溶液 II 加入后，變成一個外圍裂解，往里不裂解，中間沒有裂解的團塊。這個團塊在溶液 III 加入后，會有一部分蛋白質繼續(xù)存在于溶液中，成為蛋白質殘留的大根源。
4、使用相對過量的試劑:這是適合核酸抽提的建議。試劑相對過量的好處是：穩(wěn)定性好，純度高，操作更簡單。如果認為這樣不經濟，就少用一點菌體。
5、裂解時間:加入溶液 II 后，混勻，體系好能立即變得清澈。體系如果變得清澈了，馬上加入溶液 III 中和。如果體系不馬上變清澈，下次少用一點菌液，或者多用一點溶液。如今的質粒設計得越來越復雜了，奇怪的現(xiàn)象也越來越多，而的奇怪現(xiàn)象，多與裂解時間有關。
6、中和的操作:在1.5ml離心管中加入溶液 III 后，先顛倒兩次，使管底朝上，用指頭彈擊管底數(shù)次，再顛倒混勻。效果非常好。
7、中和后的離心去蛋白:要將蛋白質離心下去。如果發(fā)現(xiàn)離心后仍然有蛋白質漂浮在液面，繼續(xù)離心的效果并不好；而將上清倒入另外一個離心管中，再離心，效果要好許多。
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