2024年2月，國家藥監(jiān)局藥品審評中心發(fā)布《低分子量肝素類仿制藥藥學(xué)研究與評價技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》，該指導(dǎo)原則適用于采用豬小腸黏膜制備的低分子量肝素 （low-molecular-weight heparin，LMWH）的原料藥及其注射劑仿制藥。

肝素類藥品是臨床常用的抗凝血藥及溶栓藥，肝素 (heparin) 及低分子量肝素 (LMWH) 等均被納入《國家基本藥物目錄》 《世界衛(wèi)生組織基本藥品標(biāo)準(zhǔn)清單》，隨著人口老齡化、心腦血管疾病等發(fā)病率不斷上升，肝素類藥品的市場規(guī)模和臨床價值正在持續(xù)上升【1】。與傳統(tǒng)的化學(xué)結(jié)構(gòu)明確的小分子藥物不同，肝素類藥品作為多組分生化藥，原材料來自動物組織，成分復(fù)雜，本身具有化學(xué)成分異質(zhì)性及相對分子質(zhì)量多分散性的特點，很難完全表征其復(fù)雜的結(jié)構(gòu)特性。所以，采用多種技術(shù)手段對肝素類藥物分子量這一關(guān)鍵質(zhì)量屬性進(jìn)行深入研究是非常必要的。

現(xiàn)行版《中國藥典》已收載肝素類化藥品種4個，今年國家藥典委陸續(xù)發(fā)布了那曲肝素鈣、依諾肝素鈉、達(dá)肝素鈉以及他們的注射液國家藥品標(biāo)準(zhǔn)草案7個，其中包括重要的分子量與分子量分布的檢查項。四部通用技術(shù)要求中，0514 分子排阻色譜法是測定相對分子量大小及分布的主要分析手段。島津?qū)ο嚓P(guān)品種的分析推薦凝膠滲透色譜（GPC）分析系統(tǒng)，除了選擇符合藥典或標(biāo)準(zhǔn)系統(tǒng)適用性要求的凝膠色譜柱外，選用高性能、高穩(wěn)定性的示差折光檢測器是非常關(guān)鍵的。

我們對比測試過池溫控器安裝前后室溫變化對于分析穩(wěn)定性影響情況，如圖1所示。由于示差折光檢測器對室溫波動極為敏感，新型RID-20A檢測器安裝了雙重溫度控制器件，可通過消除室溫變化產(chǎn)生的影響來確保出色的基線穩(wěn)定性。此外，該檢測器還新增參比池自動清洗功能和驗證支持功能，可大大提高GPC分析的效率。

科技發(fā)展永無止境，以普通肝素和低分子肝素中均包含的天然戊糖結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)改良的全人工合成的磺達(dá)肝癸鈉這類新型抗血栓藥物的誕生，為患者提供更多安全選擇。

但是這類高選擇性Xa因子抑制劑，它的結(jié)構(gòu)中含有五個糖單元，每個糖單元上都結(jié)合了磺酸鈉基團(tuán)，具有很強的極性，在常規(guī)反相C18柱保留不佳。即便采用離子色譜分析，由于需要淋洗液濃度較高，導(dǎo)致電導(dǎo)檢測困難。不能采用常規(guī)色譜分離分析手段，磺達(dá)肝癸鈉的分子量分析又該如何進(jìn)行呢？

島津小身材好身手的臺式MALDI-TOF就非常適合這類化合物的分析，可以在無色譜分離的情況下直接對樣品的分子量及其分布進(jìn)行分析。

磺達(dá)肝癸鈉質(zhì)譜圖見上圖5。由圖可見，樣品檢測到9個分子量依次相差102 Da的離子，依次為 m/z 1705.0、m/z 1603.0、m/z1500.9、m/z1398.9、…m/z888.7，分別對應(yīng)磺達(dá)肝鈉有 0-8個SO3Na基團(tuán)被H離子取代后并丟失一個Na離子的化合物形式。

另外，樣品還檢測到m/z1727.0的離子峰，對應(yīng)磺達(dá)肝癸鈉的[M-H]形式，質(zhì)譜信號強度顯著低于 [M-Na]-及其他 SO3Na 基團(tuán)被H離子取代后并丟失一個Na離子的化合物形式，這可能是由于磺達(dá)肝癸鈉富含鈉離子，相比丟失氫離子，磺達(dá)肝癸鈉在質(zhì)譜上更容易丟失鈉離子而形成減鈉峰。除此之外，樣品還檢測到SO3Na基團(tuán)及1個Na離子全部被H離子取代后的減鈉峰，如m/z866.5對應(yīng)磺達(dá)肝癸鈉的[M-8X-2Na+H]-化合物形式（X代表一個SO3Na基團(tuán)被一個H離子取代）。

我們建立了MALDI-8030在負(fù)離子模式下分析磺達(dá)肝癸鈉分子量的方法，操作簡單，分析快速，為色譜分析困難或色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測困難的樣品分析提供理想的參考檢測手段，具有較高的實用價值。

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島津一直致力于將分析技術(shù)不斷應(yīng)用于藥物分析領(lǐng)域，為制藥行業(yè)客戶提供高效優(yōu)質(zhì)的解決方案，全力助力產(chǎn)業(yè)降本增效！

文獻(xiàn)引用：【1】胡小娟. 肝素類藥品生產(chǎn)現(xiàn)場核查常見問題分析與探討，中國醫(yī)藥工業(yè)雜志 Chinese Journal of Pharmaceuticals 2023， 54(4)：617-621

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