(一)先將過(guò)量的特異抗體（或抗原）包被于載體（酶標(biāo)板）上，通過(guò)抗原抗體反應(yīng)使待側(cè)物質(zhì)（抗原或抗體）和酶標(biāo)記物（用HRP-辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗體或抗原）也結(jié)合在載體上（固相分離），經(jīng)洗滌去除游離的酶標(biāo)記物后，加入底物，已經(jīng)結(jié)合在載體上的標(biāo)記酶促使底物顯色。終利用光電比色法，對(duì)待測(cè)物進(jìn)行定性判斷或定量測(cè)定。以上方法的檢驗(yàn)靈敏度可以達(dá)到ng/ml水平。

（二）包被酶標(biāo)板：將特異抗原溶液加入酶標(biāo)板孔內(nèi)，4℃過(guò)夜。然后用洗滌液洗滌3次到5次（洗板機(jī)洗板），這樣溶液中的特異抗原被牢固吸附在酶標(biāo)板的微孔表面，形成固相抗原，殘液及雜質(zhì)被清洗掉。

（三）加入被測(cè)樣本液（病人血清）：樣本液中若含有待測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育反應(yīng)，則與已包被的抗原產(chǎn)生特異結(jié)合，生成包被抗原與待測(cè)抗體的復(fù)合物，被吸附在酶標(biāo)板的微孔表面。然后再次進(jìn)行洗滌，去除殘液及干擾物質(zhì)。

（四）加酶結(jié)合物：經(jīng)過(guò)溫育反應(yīng)，生成包被抗原加待測(cè)抗體加酶標(biāo)抗原的三者復(fù)合物，同樣被吸附在微孔表面，然后再次洗滌，去除游離的或非特異沾附的酶結(jié)合物（洗板）。

（五）加顯色液：經(jīng)過(guò)10分鐘到20分鐘的顯色反應(yīng)，被吸附的復(fù)合物中的酶與顯色底物液生成有色溶液。此時(shí)，由于游離或非特異吸附的酶已被清除，所以溶液顏色的深淺，僅決定于已與待測(cè)物結(jié)合的酶的量，因此能真實(shí)反映待測(cè)物的濃度。被固化的酶越多，顯色就會(huì)越深，這就說(shuō)明待測(cè)物的濃度越大。

（六）加終止液：終止顯色反應(yīng)。

使用酶標(biāo)儀檢驗(yàn)：把完成顯色的酶標(biāo)板放在酶標(biāo)儀儀器上進(jìn)行光電比色檢驗(yàn)，儀器分別檢測(cè)空白孔、陰陽(yáng)性對(duì)照孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、質(zhì)控孔和患者樣本孔的吸光度值，并自動(dòng)按程序要求計(jì)算出患者樣本中待測(cè)物的濃度或進(jìn)行定性分析。