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2015版藥典中藥材中黃曲霉毒素檢測方案
黃曲霉毒素是主要由黃曲霉寄生曲霉產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物，在濕熱地區(qū)食品和飼料中出現(xiàn)黃曲霉毒素的機率zui高。
黃曲霉毒素存在于土壤、動植物、各種堅果中，特別是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麥等糧油產(chǎn)品，是霉菌毒素中毒性zui大、對人類健康危害極為突出的一類霉菌毒素。
2013年國家藥典委員會在上公布了“關于中藥中重金屬、農殘、黃曲霉毒素等物質*草案的公示”——為進一步加強中藥材的質量控制，根據(jù)國家食品藥品監(jiān)督管理局的部署和安排，經(jīng)國家藥典委委員會有關單位和專家對黃曲霉毒素、重金屬及有害元素、農藥殘留量等有害物質的控制方法、限度值以及重點品種進行試驗研究，擬在2010年版《中國藥典》的基礎上，進一步增加中藥的安全性指標控制項目，尤其是加強對中藥材中重金屬及有害元素、黃曲霉毒素、農藥殘留量的控制。2015版中國藥典對黃曲霉毒素監(jiān)控又更加完善，執(zhí)行標準也有了新的增加與提高.
2015版中藥材中黃曲霉毒素整體檢測方案全面結合2015版《中華人民共和國藥典》，以藥品GMP指南為依據(jù)，總編了黃曲霉毒素整體檢測方案
一、關于黃曲霉毒素*：對《中國藥典》收載的柏子仁、蓮子、使君子、檳榔、麥芽、肉豆蔻、決明子、遠志、薏苡仁、大棗、地龍、蜈蚣、水蛭、全蝎等14味藥材及其飲片品種項下增加“黃曲霉毒素”檢查項目，限度為“黃曲霉毒素B1不得過5 μg/kg；黃曲霉毒素G2、黃曲霉毒素G1、黃曲霉毒素B2總量不得過10 μg/kg”。
二、方法簡介
樣品經(jīng)過甲醇-水提取，提取液經(jīng)過濾、稀釋后，經(jīng)過含有黃曲霉毒素特異抗體的免疫親和柱凈化，此抗體對黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2具有專一性，黃曲霉毒素交聯(lián)在層析介質中的抗體上。首先用水或吐溫-20/PBS將免疫親和柱上的雜質除去，然后用甲醇通過免疫親和層析柱洗脫，洗脫液通過帶熒光檢測器的液相色譜儀柱后碘溶液衍生，測定黃曲霉毒素的含量；也可采用液相色譜儀柱后光化學衍生在254 nm 下用光化學的方法對黃曲霉毒素B1和G1進行衍生測定黃曲霉毒素的含量。
三、分析步驟
1. 提取
取供試品粉末（柏子仁、蓮子、使君子、檳榔、麥芽、肉豆蔻、決明子、遠志、薏苡仁、大棗、地龍、蜈蚣、水蛭、全蝎等14味藥材及其飲片及其制品）約15 g（過二號篩），精密稱定，加入氯化鈉3 g，置于均質瓶中，加入70%甲醇溶液75 mL，高速攪拌2分鐘（攪拌速度大于11 000轉/分），離心5分鐘（離心速度2 500轉/分），精密量取上清液15 mL，置于50 mL 量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，待凈化。
2015版中藥材中黃曲霉毒素整體檢測方案
2. 凈化
免疫親和柱：Welchrom ?Immunoaffinity Column（3 mL）（以下部分簡寫為Welchrom ?IAC）
（1）上樣：將準確移取15. 0 mL 樣品提取液注入Welchrom ?IAC，調節(jié)空氣壓力泵的壓力使溶液以約6 mL /min 流速緩慢通過免疫親和柱，直至2 mL-3 mL 空氣通過柱體，隨后調節(jié)開關，使液體以1-2 d/s 的速度流出；
（2）淋洗：以10 mL 水淋洗免疫親和柱兩次，棄去全部流出液，并使2 mL~3 mL 空氣通過Welchrom ?IAC，流速為2-3 d/s；
（3）洗脫：準確加入1. 0 mL 色譜級甲醇洗脫，流速為1 mL/min~2 mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測用，流速為1 d/s。
注：（1）免疫親和柱的儲存溫度為2~8℃，使用前應注意回溫，防止因免疫親和柱內抗體在低溫條件下失活而導致凈化效果不夠理想；
（2）上樣溶液中有機相的比例不能超過25%~30%，否則會因為有機溶劑的比例過高而導致凈化效果不夠理想；
（3）洗脫后液體可用于HPLC檢測。（建議用水1：1稀釋后上樣）。
3. 測定
（1）液相色譜條件
色譜柱：XB-C18，5 μm， 4.6×150 mm
流動相：甲醇：乙腈：水（40：18：42）
流速：0. 8 mL/min
熒光檢測器激發(fā)波長365 nm，發(fā)射波長445 nm
經(jīng)色譜柱分離的黃曲霉毒素需經(jīng)過光化學衍生器衍生出峰順序：G2\G1\B2\B1
①碘溶液柱后衍生化法
衍生溶液：0. 05%碘溶液（稱取碘0.5 g，加入甲醇100 mL 使其溶解，用水稀釋至1000 mL）
衍生溶液流速：0. 3 mL/min
反應管溫度：700 ℃
反應時間：1 min
② 光化學衍生法：光化學衍生器（254 nm）。
（2）定量
精密量取黃曲霉毒素混合標準品（黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2標示的濃度分別為1.0 μg/mL、0.3 μg/ mL、1. μg/ mL、 0.3 μg/ mL），置于10 mL 量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，作為儲備液。精密量取儲備液1 mL，置于25 mL 量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，即得。
分別精密吸取上述混合對照品溶液5 μL、10 μL、15 μL、20 μL、25 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，以峰面積為縱坐標，進樣量為橫坐標，繪制標準曲線。另吸取上述試品溶液20~25 μl，注入液相色譜儀，測定峰面積，從標準曲線上讀出供試品中相當于黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2的量，計算，即得。
取樣品洗脫液1. 0 mL 加入重蒸餾水定容至2. 0 mL，用進樣器吸取100 μL 注入液相色譜儀，在上述色譜條件下測定試樣的響應值（峰高或峰面積）。經(jīng)過與黃曲霉毒素標準溶液譜圖比較響應值得到試樣中黃曲霉毒素B1、B2、G1和G2的濃度。
黃曲霉毒素檢測耗材：
濾紙；
漏斗；
錐形瓶：100ml；
玻璃纖維過濾器；
10 ml —次性注射器；
吐溫20;
磷酸氫二鈉；
磷酸二氫鉀；
氯化鉀；
氯化鈉；
甲醇，分析純；
甲醇，色譜純；
乙腈，色譜純；
正己烷，分析純；