TransIT®-Lenti Transfection Reagent

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【Mirus新品*】TransIT®-Lenti Transfection Reagent——重組慢病毒生產(chǎn)的理想選擇

Mirus公司新推出轉染試劑TransIT^®-Lenti Transfection Reagent，該產(chǎn)品適用于將載體轉染至貼壁的HEK 293T細胞中，可提高轉染效率，增加重組慢病毒產(chǎn)量。

產(chǎn)品特點：

高性能——高達八倍的功能性滴度

操作簡便——無需更換培養(yǎng)液基 

無動物源性成分——安全可靠

產(chǎn)品信息

相關產(chǎn)品*——TransduceIT™ Transduction Reagent

TransduceIT™ Transduction Reagent是一款陽離子聚合物試劑，可顯著提高靜止和分裂期的哺乳動物細胞中逆轉錄病毒的轉導和轉基因表達。

產(chǎn)品信息

圖1. TransIT-Lenti轉染試劑具有高功能性滴度.分別使用TransIT-Lenti (3:1, vol:wt), Lipofectamine® 2000 (3:1), Lipofectamine® 3000 (3:1:1), 25 kDa PEI (6:1), 和CaPO4 precipitation (4 µg pDNA/well)五種試劑將MISSION®載體（pLKO.1-puro-CMV-TurboGFP™載體和慢病毒包裝試劑）轉染至貼壁293T/17細胞中。收集上清液，過濾（0.45 µm），用293T/17細胞滴定。慢病毒轉導實驗使用了TransduceIT™（8 µg/ml），轉導72h后使用guava easyCyte™ 5HT流式細胞儀檢測GFP表達情況。功能性滴度根據(jù)病毒的稀釋液與20% GFP陽性細胞進行計算。

圖2. 使用TransIT-Lenti實現(xiàn)高效轉染. 使用TransIT®-Lenti轉染試劑 (3:1, vol:wt)將MISSION®載體（pLKO.1-puro-CMV-TurboGFP™載體和慢病毒包裝試劑）轉染至貼壁293T/17細胞中。轉染48h后檢測GFP效率。圖片于轉染48h后拍自熒光顯微鏡。鏡下細胞變圓和細胞融合是由于假型化重組慢病毒的VSV-G 蛋白的高表達。

重組慢病毒顆粒和靶細胞感染概述

（1） 將包括編碼目的基因、水泡性口炎G蛋白（VSV-G）和必需的病毒蛋白（例如gag，pol和rev）的3-4種質粒轉染至生產(chǎn)細胞（例如293T）中。

（2） 病毒從生產(chǎn)細胞漿膜以出芽的方式組裝及釋放到上清液中，并以VSV-G的囊膜蛋白包裹。將含有病毒的培養(yǎng)液用0.45微米的濾器進行過濾以除去細胞。

（3） 重組慢病毒顆粒轉導靶細胞常用陽離子聚合物來增加聚合和攝取。病毒進入細胞后脫衣殼，將RNA基因組和病毒的酶暴露出來。病毒RNA被逆轉錄成DNA，然后整合到宿主基因組中。

（4） 轉錄和翻譯后由細胞產(chǎn)生目的基因所編碼的蛋白質。

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