即使樣品和流動(dòng)相已做過(guò)前處理,也仍難以完成避免柱子受到污染,因此必須對(duì)柱子行清洗。清洗應(yīng)定期進(jìn)行,如果在短期內(nèi)分析許多樣品,則以每日清洗一次為宜,至少也應(yīng)一周一次,防止有太多的雜質(zhì)在柱上堆積。
反相柱的常規(guī)洗滌辦法是:分別取甲醇、三氯甲烷、甲醇-水各20倍柱體積(既對(duì)于一根4.6mmX25cm的柱來(lái)說(shuō),通常是50-60ml,而對(duì)于9.4mm內(nèi)經(jīng)X50cm的柱來(lái)說(shuō),通常是500-600ml) ,使之通過(guò)柱子。然后用流動(dòng)相平衡(通常仍用20倍柱體積),柱一般將恢復(fù)正常。如果選擇性仍和以前不一樣,則表明還有其他雜質(zhì)留在柱子里,這時(shí)應(yīng)考慮更加嚴(yán)格的清洗:先用20倍柱體積的水,再用相同體積0.05mol/L硫酸,zui后用流動(dòng)相溶劑。酸洗常能洗下有機(jī)溶劑所不能洗下的剩余雜質(zhì)。在低pH值下做長(zhǎng)期(一天或更長(zhǎng))清洗是不適宜的,但50ml洗液以2ml/min的速度清洗25min,一般對(duì)健合相沒(méi)有損害。注意,強(qiáng)堿不能用來(lái)清洗任何微粒硅膠柱(不論是健合相還是非健合相),因?yàn)楣枘z骨架會(huì)溶解。對(duì)于嚴(yán)重污染的反相柱,只能采用再生的方法。
2.液相色譜柱柱頭空隙的處理
拆下不銹鋼燒結(jié)過(guò)濾器后,檢查柱床,??梢?jiàn)柱頭塌陷,此時(shí)先剔掉無(wú)規(guī)則床層和帶色填料,使柱床呈白色并*水平,再使甲醇作糊狀填料勻漿液,將填料勻漿液滴在柱上靠重力從勻漿液中排出甲醇液,重復(fù)數(shù)次,直到水平,完成了柱的再生。此時(shí),如果柱頭孔隙深度小于1cm,可以采用下述局部重裝的辦法,否則,柱應(yīng)當(dāng)*重裝或更換。
柱入口局部重裝時(shí)采用的填料可以和原填料一樣,也可以用玻璃珠。粒徑大于20um的可用敲打充填法干裝。如果粒徑小于20um則要用合適的溶劑配成勻漿,勻漿逐次加入,每次加入前都要使上一次加入的全部沉降。把孔隙填滿后,用刮刀將填料刮平,更換柱入口接頭,把柱重新接到液相儀器上,慢慢地增加流動(dòng)相流速和系統(tǒng)壓力,直到操作上限為止。讓相當(dāng)于10-20 倍柱體積的流動(dòng)相通過(guò)柱子,然后逐漸降低流速,并使壓力降為零,再把柱子卸下來(lái),并卸下入口接頭,觀察柱的入口。此時(shí)孔隙應(yīng)當(dāng)減小,但是由于新加入的填料在系統(tǒng)的操作壓力下壓入柱頭,孔隙不可能一次就被全部充滿。重復(fù)上述重裝過(guò)程,直到柱上加不進(jìn)更多的填料為止。一旦柱子填充完畢,可加進(jìn)混合樣品,測(cè)定柱子的性能是否已經(jīng)改善。
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