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高效液相色譜儀按其分離機(jī)理，可分為四種類型
高效液相色譜儀(HPLC)是應(yīng)用高效液相色譜原理，主要用于分析高沸點(diǎn)不易揮發(fā)的、受熱不穩(wěn)定的和分子量大的有機(jī)化合物的儀器設(shè)備。它由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成。HPLC廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、食品科學(xué)、藥物研究以及環(huán)境研究中。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入檢測(cè)系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱（固定相）內(nèi)，由于樣本溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的“吸附-解吸”的分配過(guò)程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過(guò)檢測(cè)器時(shí)，樣本濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式輸出檢測(cè)結(jié)果。
液相色譜儀按其分離機(jī)理，可分為四種類型。
吸附色譜法的固定相為吸附劑，色譜的分離過(guò)程是在吸附劑表面進(jìn)行的，不進(jìn)入固定相的內(nèi)部。與氣相色譜不同，流動(dòng)相（即溶劑）分子也與吸附劑表面發(fā)生吸附作用。在吸附劑表面，樣品分子與流動(dòng)相分子進(jìn)行吸附競(jìng)爭(zhēng)，因此流動(dòng)相的選擇對(duì)分離效果有很大的影響，進(jìn)口液相色譜儀一般可采用梯度淋洗法來(lái)提高色譜分離效率。
在聚合物的分析中，吸附色譜一般用來(lái)分離添加劑，如偶氮染料、抗氧化劑、表面活性劑等，也可用于石油烴類的組成分析。
分配色譜法
這種色譜的流動(dòng)相和固定相都是液體，樣品分子在兩個(gè)液相之間很快達(dá)到平衡分配，利用各組分在兩相中分配系數(shù)的差異進(jìn)行分離，類似于萃取過(guò)程。
一般常用的固定液有β（ODPN）、聚乙二醇（PEG400～4000）、*撐乙二醇（TMG）和角鯊?fù)椋⊿Q）。采用與氣相色譜（GC）同樣的方法，將固定液涂漬在多孔的載體表面，但在使用中固定液易流失。目前，應(yīng)用較多的是鍵合固定相。在這種固體相中，固定液不是涂在載體表面，而是通過(guò)化學(xué)反應(yīng)在純硅膠顆粒表面鍵合上某種有機(jī)基團(tuán)。
例如，利用氯代十八烷基硅烷與硅膠表面的羥基（-OH）之間的反應(yīng)就可以形成一烷基化表面。這種固定液的優(yōu)點(diǎn)是不易被流動(dòng)相剝蝕。在分配色譜法中，流動(dòng)相可為純?nèi)軇?，也可以采用混合溶劑進(jìn)行梯度淋洗，其極性應(yīng)與固定液差別大一些，以避免兩者之間相溶。
在我們做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候用液相色譜儀分析過(guò)程的時(shí)候影響溶液遷移的因素比較多。同一樣的組分在不同的色譜調(diào)件下保留的值也會(huì)不同，即使是在一樣的測(cè)定條件下。同一組分在不同的色譜柱上面保留的數(shù)值差別也會(huì)不同。所以，液相色譜和氣象色譜相對(duì)比，定性的難度大很多，液相色譜儀分析經(jīng)常使用的定性方法有很多。比如，利用已知標(biāo)準(zhǔn)樣品定性，利用檢測(cè)器的選擇性定性或者利用紫外檢測(cè)器全波長(zhǎng)掃描功能等來(lái)定性。