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產(chǎn)品描述

LyGreen核酸染料是一種新型的的雙鏈DNA結(jié)合飽和熒光染料，是新一代用于HRM分析的熒光染料，也可用于實(shí)時(shí)定量PCR（qPCR）。該染料結(jié)構(gòu)上由兩個(gè)單體染料分子通過(guò)一個(gè)彈性臂連接成一個(gè)二聚體，在沒(méi)有DNA存在時(shí)，該結(jié)構(gòu)呈無(wú)熒光環(huán)狀結(jié)構(gòu)，一旦有DNA出現(xiàn)，則恢復(fù)隨機(jī)形態(tài)并與DNA結(jié)合發(fā)出強(qiáng)烈的綠色熒光。

與市場(chǎng)上其他熒光染料如SYBR Green I 相比，LyGreen具有如下優(yōu)點(diǎn)：（1）靈敏度高：在推薦濃度下使用時(shí)可以獲得比SYBR Green I 更強(qiáng)的信號(hào)（2）準(zhǔn)確：結(jié)合雙鏈DNA，變形時(shí)染料不遷移，熒光信號(hào)準(zhǔn)確反映雙鏈DNA變化情況。過(guò)量染料形成二聚體，而不游離，使得LyGreen對(duì)PCR的抑制遠(yuǎn)小于SYBR Green I，因此，使用LyGreen進(jìn)行的qPCR實(shí)驗(yàn)可以使用快速PCR步驟。（3）穩(wěn)定性好：在正常的儲(chǔ)存、操作和PCR過(guò)程中不會(huì)被破壞。在緩沖溶液中的染料可以安全的儲(chǔ)存在室溫或冰箱里，也可以反復(fù)凍融。（4）安全：細(xì)胞膜穿透性測(cè)試表明，LyGreen幾乎不能穿透細(xì)胞膜。（5）兼容性：和SYBR Green I 光譜相似，使用不同品牌qPCR儀器時(shí)不需改變光譜元件設(shè)置，也無(wú)需改變操作步驟，qPCR完成后，無(wú)需加入其它核酸染料便能直接在凝膠成像系統(tǒng)下觀察分析。（6）重復(fù)性好（如圖1）：特殊設(shè)計(jì)染料，相同反應(yīng)體系下，熒光信號(hào)釋放僅與雙鏈濃度有關(guān)，線性。

應(yīng)用實(shí)例

圖1. LyGreen染料用于綿羊FecB基因HRM分析.

HRM分析設(shè)備為LightCycler@480熒光定量PCR儀(德國(guó)羅氏)

訂購(gòu)信息

運(yùn)輸與保存方法

藍(lán)冰運(yùn)輸。-20℃干燥避光保存，有效期12個(gè)月。

光學(xué)性質(zhì)

激發(fā)波長(zhǎng)= 497 nm

發(fā)射波長(zhǎng)= 520 nm

實(shí)驗(yàn)方法

PCR反應(yīng)的配制（50 μL）

注意事項(xiàng)

1. 請(qǐng)根據(jù)不同的儀器類(lèi)型，不加入或加入合適濃度的參比染料ROX。該體系需根據(jù)所使用的Taq酶的不同進(jìn)行適當(dāng)優(yōu)化。

2. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量于冰上向無(wú)菌離心管中依次加入水，Taq poLymerase buffer, dNTPs, MgCl2, LyGreen, Taq poLymerase, and primers等配制qPCR反應(yīng)體系（1×Master mix）。

3. 將1×Master mix 適量分裝至無(wú)菌PCR管中，并加入DNA (50 ng/反應(yīng))。

4. 按照儀器類(lèi)型選擇合適的擴(kuò)增程序。

5. 做qPCR時(shí)注意設(shè)置陽(yáng)性和陰性對(duì)照。

6. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。