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產品描述
細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒(Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit)是一種采用經典的碘化丙啶染色(Propidium staining，即 PI staining)方法進行細胞周期與細胞凋亡分析的檢測試劑盒。
碘化丙啶(Propidium，簡稱 PI)是一種雙鏈 DNA 的熒光染料。碘化丙啶和雙鏈 DNA 結合后可以產生熒光，并且熒光強度和雙鏈 DNA 的含量成正比。細胞內的 DNA 被碘化丙啶染色后，可以用流式細胞儀對細胞進行 DNA 含量測定，然后根據 DNA 含量的分布情況，可以進行細胞周期和細胞凋亡分析。
碘化丙啶染色后，假設 G0/G1 期細胞的熒光強度為 1， 那么含有雙份基因組 DNA 的 G2/M 期細胞的熒光強度的理論值為 2，正在進行 DNA 復制的 S 期細胞的熒光強度為 1-2 之間。凋亡細胞由于細胞核發(fā)生濃縮以及發(fā)生 DNA fragmentation 導致部分基因組 DNA fragmentation 在染色過程中丟失，因此凋亡細胞碘化丙啶染色后呈現(xiàn)明顯的弱染，即熒光強度小于 1，在流式檢測的熒光圖上出現(xiàn)所謂的 sub-G1 峰，即凋亡細胞峰。
細胞發(fā)生凋亡時，由于胞漿和染色質濃縮、核碎裂， 產生凋亡小體，使細胞的光散射性質發(fā)生變化。在細胞凋亡的早期，細胞對前向角光散射的能力顯著降低，對側向光散射的能力增加或沒有變化。在細胞凋亡的晚期，前向和側向光散射的信號均降低。因此可通過流式細胞儀測定細胞光散射的變化觀察細胞凋亡情況。
本試劑盒通常應用于培養(yǎng)的貼壁或懸浮細胞的細胞周期與細胞凋亡檢測。如果用于組織的細胞周期與細胞凋亡檢測，則必須把組織消化成單細胞狀態(tài)，才可以進行檢測。
訂購信息
產品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
Cell Cycle and Apoptosis Kit(細胞周期檢測試劑盒) | AC12L543 | 50T |
Cell Cycle and Apoptosis Kit(細胞周期檢測試劑盒) | AC12L544 | 100T |
產品組分
組分 | 50T | 100T |
A.染色緩沖液 | 25 mL | 50 mL |
B. 碘化丙啶染色液 (20×) | 1.25 mL | 1.25mL*2 |
C. RNase A (50×) | 0.5 mL | 1 m |
保存方法
冰袋運輸，-20℃保存，有效期見外包裝。碘化丙啶染色液（20×）需避光保存。
使用方法
1.細胞樣品的準備：
對于貼壁細胞：
（1）首先小心收集細胞培養(yǎng)液到離心管內備用。
（2）用胰酶消化細胞，至細胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時，加入前面收集的細胞培養(yǎng)液，吹打下所有的貼壁細胞，并輕輕吹散細胞。
（3）再次收集到離心管內，用1000 g 左右離心 3-5 min，沉淀細胞。
注：對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。
（4）小心吸除上清，可以殘留約 50 μL 左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細胞。加入約 1 mL 冰浴預冷的 PBS，重懸細胞，并轉移到 1.5 mL 離心管內。再次離心沉淀細胞，小心吸除上清，可以殘留約 50 μL 左右的 PBS，以避免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞，避免細胞成團。
對于懸浮細胞：
（1）用1000 g 左右離心 3-5 min，沉淀細胞。注：對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。
（2）小心吸除上清，可以殘留約 50 μL 左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細胞。加入約 1 mL 冰浴預冷的 PBS，重懸細胞，并轉移到 1.5 mL 離心管內。再次離心沉淀細胞，小心吸除上清，可以殘留約 50 μL 左右的 PBS，以避免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞，避免細胞成團。
2.細胞固定：
（1）加入 1 mL 冰浴預冷 75-80%乙醇，輕輕吹打混勻，對于易成團的細胞，要一邊加入乙醇一邊震蕩混勻。如果細胞株本身極易成團，可以先將細胞充分重懸在250 μL 的 PBS 中，一邊逐滴加入 750 μL 的無水乙醇。乙醇終濃度控制在 75%左右即可，PBS 體積及無水乙醇體積可按比例調整。注：切記是先重懸在 PBS 中，不能重懸在培養(yǎng)基中再加無水乙醇！
（2）將 75-80%的乙醇重懸的樣品置于-20oC，固定過夜。（如著急檢測，-20℃ 固定 1-2 h 也可以進行檢測；乙醇固定的樣品可以在-20℃保存1個月）
（3）1000 g 左右離心 3-5 min， 沉淀細胞。注：對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。
（4）小心吸除上清，可以殘留約 50 μL 左右的 75-80%乙醇，以避免吸走細胞。加入約 1 mL 冰浴預冷的 PBS，重懸細胞。再次離心沉淀細胞，盡可能將上清去除干凈。
3.碘化丙啶染色液的配制：
參考下表，根據待檢測樣品的數(shù)量配制適量的碘化丙啶染色液：
| 內容 | 一個樣品 | 6 個樣品 | 12 個樣品 |
| 染色緩沖液 | 0.5 mL | 3 mL | 6 mL |
| 碘化丙啶染色液(20×) | 25μL | 150 μL | 300 μL |
| RNase A (50×) | 10 μL | 60 μL | 120 μL |
| 終體積 | 0.535 mL | 3.21 mL | 6.42 mL |
【注】：配制好的碘化丙啶染色液短時間內可以 4oC 保存，宜當日使用。
4.染色：
（1）每管細胞樣品中加入 0.5 mL 碘化丙啶染色液， 緩慢并充分重懸細胞沉淀，室溫避光孵育 15-30 min。（2）隨后可以 4oC 或冰浴避光存放，染色完成后宜在 24 小時內完成流式檢測（建議能在當日完成流式檢測）。
5.流式檢測和分析：
用流式細胞儀在 535 nm 激發(fā)波長， 615 nm 發(fā)射波長的通道檢測紅色熒光，同時檢測光散射情況。采用適當分析軟件進行細胞 DNA 含量分析和光散射分析。
注意事項：
1.熒光染料均存在淬滅問題，保存和使用過程中請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
2.碘化丙啶對人體有刺激性，請注意適當防護。
3.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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