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色譜柱傷不起！關(guān)于液相色譜柱使用的6大注意事項(xiàng)
喜愛養(yǎng)花的人都知道，不同的花卉有不同的特性，對光照、水分、溫濕度的需求都不相同。要了解這些，才能使花草處于健康的狀態(tài)，時不時為你鮮花綻放。反之，不了解這些，花草就處于不健康狀態(tài)，不僅不開花，還會把花養(yǎng)死。
那么，液相色譜柱做為比較昂貴的色譜耗材，也具有很多特性，如果不了解這些注意事項(xiàng)，一不留神就會用壞。
關(guān)于液相色譜柱的使用注意事項(xiàng)，
一般有以下幾點(diǎn)：
01 過濾流動相和樣品
流動相通常由水或緩沖溶液與有機(jī)溶劑混合而成。原則上，所有經(jīng)過色譜柱的流動相均應(yīng)過濾，但在實(shí)際操作上應(yīng)視具體情況而有所區(qū)別：當(dāng)有機(jī)溶劑用色譜純級，水用石英亞沸水或其它超純水時，在能確保水和有機(jī)溶劑的質(zhì)量且沒有受到污染時，過濾并無更多實(shí)際意義。
當(dāng)流動相中含有緩沖鹽時，則過濾是必要的，如前所述，當(dāng)緩沖溶液放置一段時間，在使用前還應(yīng)重新過濾（含有緩沖鹽的流動相，長菌較快，建議現(xiàn)用現(xiàn)配）。
所配制的樣品試液在注入流路系統(tǒng)前均要經(jīng)0.45μm(0.22μm則更好)孔徑濾膜過濾。要注意區(qū)分水系和油系，二者不可混用，以防止濾膜溶解而造成污染。
裝流動相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線濾器要定期清洗和更換，以避免濾器因過載而起不到過濾作用。
02 凈化樣品
當(dāng)樣品中含有對色譜柱有損害的化學(xué)成分，如產(chǎn)生永jiu性吸附的蛋白質(zhì)、糖等有機(jī)分子和強(qiáng)吸附性物質(zhì)，以及可能對柱填料產(chǎn)生破壞作用的基團(tuán)離子。在進(jìn)樣前應(yīng)盡可能對樣品進(jìn)行分離提純以除去多余雜質(zhì)組分。
03 避免過高柱壓
雖然高效液相色譜柱能耐受的壓力可達(dá)6000psi (磅/平方英寸)，但過高及過大的壓力變化均會縮短色譜柱的壽命，避免的方法是：
1）柱壓過高時，盡可能采用較小的流速，以不超過柱最大允許壓力的一半為宜。
2）當(dāng)流速較大時，應(yīng)采取流速梯度的辦法使流速分步到位。
3）使用手動進(jìn)樣閥時，進(jìn)樣閥的切換要盡可能的快。否則超過20%的壓力沖擊會很快使柱報廢。當(dāng)使用多柱聯(lián)用時，柱切換要避免在高壓下進(jìn)行。
04注意溫度和酸堿度
一般以硅膠為基質(zhì)的色譜柱最高使用溫度不超過60℃，以低于40℃為宜，特別是在流動相pH接近使用限度時，更應(yīng)降低使用溫度。
溫度過高會加快鍵合相的水解和硅膠的溶解，從而使填料性質(zhì)改變，柱床塌陷，降低柱效，改變峰形。
請您留意色譜柱說明書中的pH適用范圍，目前市面上大部分鍵合硅膠色譜柱表示的pH適用范圍是2-10，但在實(shí)際使用時應(yīng)避免ji端的pH條件。（當(dāng)pH≤2時，建議使用月旭Ultimate® LP系列色譜柱；當(dāng)pH≥8時，建議使用月旭Xtimate®系列色譜柱）。若您原有的色譜柱在偏堿性條件（pH≥8）下使用，可通過以下方法避免柱損害：
1）在泵和進(jìn)樣閥之間加裝預(yù)柱（飽和柱）來飽和流動相。
2）降低使用溫度。
3）檢驗(yàn)完畢后立即用與所使用的流動相互相混溶的“溫和溶劑"徹di清洗。
05 正確及時的沖洗
開始試驗(yàn)前，應(yīng)了解柱中當(dāng)前是何種溶劑。對于新色譜柱，如無特殊說明均為評價報告中所用流動相。柱中當(dāng)前溶劑一定要與分析樣品所用流動相互溶，如不能混溶，要用與二者均能相互混溶的第三種溶劑過渡。
06 加裝保護(hù)柱
保護(hù)柱的作用：過濾掉來自流動相和樣品的化學(xué)“拉圾"同時也可以有效除去流動相和樣品中的不溶物。盡管現(xiàn)在的色譜儀在流動相吸入口、進(jìn)樣閥后部以及在色譜柱的兩端都裝有不同孔徑的在線過濾器，但在線過濾器只能除去不溶性顆粒而不能除去化學(xué)污染，因此，加裝保護(hù)柱是必要的，特別是在分析中藥、中成藥等復(fù)雜混合物和生物樣品時更是保護(hù)分析柱bi不可少的措施。
保護(hù)柱填料應(yīng)與分析柱一致，粒徑可較分析柱大。保護(hù)柱屬消耗品，經(jīng)過一定次數(shù)的樣品分析（50～100次）后，出現(xiàn)柱壓顯著升高或峰形變壞或基線漂移時，應(yīng)考慮更換保護(hù)柱。