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非水反相色譜法應(yīng)用案例及注意事項(xiàng)
非水反相色譜法（NARP）為反相色譜法的一種特殊模式，主要用來分離疏水性很強(qiáng)不溶于水的樣品如脂類、合成聚合物等，這些樣品的保留能力很強(qiáng)，流動相全部由有機(jī)溶劑組成，不使用強(qiáng)極性的水溶液。非水反相高效液相色譜法可做為脂溶性藥物和非極性含氮有機(jī)化合物及其鹽類藥物的常規(guī)分析方法[1]，中藥中的一大類有效成分脂溶性大，不溶于水，甚至也難溶于甲醇，因此非水反相色譜也常應(yīng)用于中藥質(zhì)量控制[2]。
月旭科技色譜柱應(yīng)用于某中藥配方顆粒中甘油酯類樣品分析案例如下：
非水反相色譜中的流動相是由極性較強(qiáng)的有機(jī)溶劑A和極性較弱的有機(jī)溶劑B組成。A溶劑常用乙腈或甲醇，B溶劑常用四氫呋喃、異丙醇、二氯甲烷、甲基叔丁基醚或者其他極性較弱的有機(jī)溶劑。
非水反相色譜法方法優(yōu)化同反相色譜法，主要通過改變%B或B溶劑的極性來調(diào)節(jié)，等度或梯度都能使用，同時柱溫對樣品的分離也有影響。一般shou選采用ACN（A）和THF（B）的混合溶劑為作為初始流動相。若用100%THF樣品保留仍太強(qiáng)，可以用極性較弱B溶劑（如二氯甲烷或氯仿）來替換，但是要考慮使用二氯甲烷或氯仿的檢測波長。
需注意，在使用非水反相色譜時，需要將整個系統(tǒng)和色譜柱中的水相徹di沖洗過渡，儀器系統(tǒng)應(yīng)保證已升級到正相，避免硬件損傷。
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[1] 《非水反相高效液相色譜法在非極性藥物分析中的應(yīng)用研究》
[2]《非水反相液相色譜法在中藥質(zhì)量控制中的應(yīng)用》