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液相方法開發(fā)案例 | 根據(jù)樣品特性選擇檢測器和分離模式
液相色譜檢測方法的建立需要針對不同的樣品和分析目的，選用不同的分離模式和檢測器，充分發(fā)揮儀器性能，高效地達到分析目標。通常使用單一檢測器直接檢測可達到目標，必要時可衍生化后再檢測，或用多檢測器組合檢測。分離模式選擇與檢測器選擇的原則基本統(tǒng)一，即根據(jù)分析物結構性質(zhì)初步判斷分離模式及流動相的選擇：根據(jù)分析物結構性質(zhì)、分離模式、樣品處理方式、流動相的選擇等進行檢測器的配套選擇。分離模式和檢測器的選擇是色譜方法開發(fā)中不可分割的相互統(tǒng)一的重要環(huán)節(jié)。
關于分離模式和檢測器的選擇，
以下案例或可說明一二
脂肪族生物胺檢測分析
脂肪族生物胺樣品特性：此類物質(zhì)紫外可見光區(qū)吸收極弱，衍生化程序繁瑣效率低且易誤差損失，是水溶性的極性物質(zhì)。
方法開發(fā)思路：根據(jù)這些基本條件，我們判斷可以選擇HILIC模式，ELSD檢測器直接檢測。
檢測效果見下圖：
月旭Ultimate® HILIC Amphion II
對四種脂肪族生物胺的分離
甘油酯檢測分析
甘油酯樣品特性：此類物質(zhì)為脂溶性大，不溶于水或難溶于甲醇的非極性物質(zhì)。
方法開發(fā)思路：這樣的物質(zhì)適用非水反相色譜法，案例見<非水反相色譜法應用案例及注意事項>。
氨基酸檢測
氨基酸樣品特性：部分紫外吸收弱，大極性和水溶性。
方法開發(fā)思路：可選擇衍生化法和非衍生化法。
兩種方法的分離效果見下圖：
月旭Ultimate® Amino Acid Plus
對23種氨基酸的非衍生法分離
月旭Ultimate® Amino Acid
對19種氨基酸的衍生化法分離
單糖寡糖類分析
單糖寡糖類樣品特性：水溶性的極性樣品，弱紫外可見吸收。
方法開發(fā)思路：這類物質(zhì)常選擇示差檢測器。
月旭Ultimate® XB-NH2 分析乳果糖
蛋白、RNA，病毒等樣品分析
蛋白、RNA，病毒等樣品特性：大分子。
方法開發(fā)思路：選擇體積排阻色譜法。
月旭Xtimate® SEC-120 分析RNA
月旭Xtimate® SEC-2000
分析去致病基因的痘病毒
月旭Xtimate® SEC-300 分析IgG蛋白
關于流動相的選擇，請延申閱讀<高效液相色譜中溶劑與檢測器的兼容性>。