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離子交換液相色譜法中緩沖鹽的使用
離子交換液相色譜法中緩沖鹽的使用
01
離子交換色譜法的基本原理
離子交換法是針對(duì)離子型樣品，根據(jù)樣品離子與固定相表面離子交換基團(tuán)的交換能力差異進(jìn)行分離。
相較于經(jīng)典的離子交換樹(shù)脂，硅膠基質(zhì)離子交換固定相，機(jī)械強(qiáng)度高，耐高壓，不溶脹，傳質(zhì)快，柱效高。
021
離子交換法中色譜柱的選擇
離子交換色譜法中，色譜柱的選擇需要與待測(cè)組分相匹配，通常不用離子交換柱同時(shí)分析陰離子和陽(yáng)離子。
0301
離子交換的影響因素
樣品在離子交換柱中的保留分離，除與樣品離子與固定相的作用強(qiáng)弱有關(guān)，還受到流動(dòng)相的pH、離子強(qiáng)度、有機(jī)溶劑種類(lèi)等因素的影響。
pH的影響
pH的變化會(huì)改變離子交換基團(tuán)上可解離的 H+ 或者OH- 的數(shù)量，因此直接影響固定相的離子交換容量。pH對(duì)離子交換能力的影響如下圖所示。
在反相色譜與離子交換中，有一個(gè)容易混淆的地方——pH值與pKa的關(guān)系。
反相色譜中，緩沖鹽主要是抑制樣品中的離子解離，保持分子狀態(tài)，來(lái)增強(qiáng)待測(cè)物的保留；離子交換中，緩沖鹽主要是促進(jìn)樣品中的離子解離，保持離子狀態(tài)，以提高待測(cè)物與固定相的離子交換作用。
因此，陰離子交換（酸性化合物）通常選擇pH>pKa+2.0；陽(yáng)離子交換（堿性化合物）通常選擇pH<pKa-2.0.
離子強(qiáng)度的影響
1. 由于含有不同離子的緩沖鹽交換作用不同，因此相對(duì)洗脫強(qiáng)度順序也存在差異。
含有陰離子的鹽：（強(qiáng)）檸檬酸根>PO43->HCOO->CH3COO->OH-（弱）
含有陽(yáng)離子的鹽：（強(qiáng)）K+>NH4+>Na+>H+>（弱）
2. 流動(dòng)相中鹽的濃度越高，其與樣品離子爭(zhēng)奪固定相上反電荷位置的能力就越強(qiáng)，從而樣品的保留效果變差，可通過(guò)調(diào)節(jié)流動(dòng)相中的緩沖鹽濃度改變保留時(shí)間。
有機(jī)溶劑的影響
在離子交換中，加入少量的甲醇、乙腈等有機(jī)溶劑，可以增加樣品的溶解度，減少峰拖尾，但是也可能會(huì)降低樣品的保留。
因此，在離子交換方法優(yōu)化時(shí)，可以根據(jù)待測(cè)物的性質(zhì)，從梯度洗脫程序，緩沖鹽的種類(lèi)、濃度、pH，以及有機(jī)相的種類(lèi)和比例，這幾個(gè)方面來(lái)進(jìn)行調(diào)整。
離子交換色譜柱推薦
（一）強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱
CAPCELL PAK SCX UG80
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：
1. 氫型強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱
2. 兼具包膜技術(shù)和高純硅膠的優(yōu)點(diǎn)
3. 良好的穩(wěn)定性、壽命和性價(jià)比
檢測(cè)項(xiàng)目：
二甲雙胍、利巴韋林、葡jia胺、三聚氰胺、更昔洛韋、水蘇堿、羧甲司坦、普魯卡因按、苯扎氯銨、氨甲環(huán)酸、水溶性維生素、核苷酸、生物胺等。
（二） 弱陰離子交換柱
CAPCELL PAK NH2 UG80
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：
1. 采用包膜技術(shù)和“橋式”鍵合方式
2. 可在LC-MS中使用
3. 正相、弱陰離子交換兩種分配模式
檢測(cè)項(xiàng)目：
糖類(lèi)、尿囊素、奈達(dá)鉑、糖精、奎尼酸、雙氰胺/三聚氰胺、有機(jī)酸、維生素、VE、泛醇、核苷類(lèi)、百草枯等。