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當(dāng)前位置:蒂科(上海)生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>動物血清的正確熱滅活方法
動物血清的熱滅活非常容易造成蛋白析出增多,若非必要,可以無需做此操作。若必須做動物血清的熱滅活,請嚴(yán)格遵守以下步驟:
1、保證血清*融化狀態(tài),溫度接近常溫。
2、保證水浴溫度56℃、30分鐘的原則,在水浴過程中每隔2-3分鐘搖晃瓶子,使血清內(nèi)部受熱均勻,直至滅活時間結(jié)束。
注意事項:
溫度過高、時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多,甚至嚴(yán)重影響血清的品質(zhì)。在56℃水浴中,持續(xù)恒溫30分鐘。在此過程中每隔2-3分鐘搖晃瓶子,使其受熱均勻,減少蛋白的析出。
為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活的補體參與溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué)研究,培養(yǎng)ES細(xì)胞,昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時,推薦使用熱滅活血清。
實驗顯示,經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn),或沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量,而造成細(xì)胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是小黑點,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴增。若非必須,可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時間,更確保血清的質(zhì)量!
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