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當(dāng)前位置:蒂科(上海)生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中血清熱滅活的作用和意義
一、血清滅活的目的是什么?
1、血清熱滅活目的主要是為了去除血清中補(bǔ)體等對(duì)熱敏感的物質(zhì),但是在胎牛血清中對(duì)補(bǔ)體的滅活則明顯沒(méi)有必要。
2、實(shí)驗(yàn)員曾對(duì)商業(yè)胎牛血清中的補(bǔ)體成分進(jìn)行測(cè)定,他們發(fā)現(xiàn)胎牛血清中含有的C1、C6僅達(dá)成年動(dòng)物血清的1-3%,而其它補(bǔ)體成分僅有成年動(dòng)物的5-50%,至于補(bǔ)體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。通過(guò)補(bǔ)體固定實(shí)驗(yàn),也未發(fā)現(xiàn)有明顯的溶血現(xiàn)象。多數(shù)實(shí)驗(yàn)室在培養(yǎng)前將培養(yǎng)液進(jìn)行預(yù)熱的過(guò)程,也對(duì)熱敏的補(bǔ)體有滅活的作用。
3、熱滅活另一個(gè)目的是為了使支原體失活。
二、血清使用前是否都必須熱滅活?
1、在免疫學(xué)研究、培養(yǎng)ES細(xì)胞、昆蟲(chóng)細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí),推薦使用熱滅活血清。而對(duì)于其他大多數(shù)的細(xì)胞來(lái)說(shuō)是不需要熱滅活血清的。
2、很多情況下,熱滅活并不會(huì)改善細(xì)胞的生長(zhǎng),反而會(huì)降低了支持細(xì)胞生長(zhǎng)的能力。即使在少數(shù)有促進(jìn)的情況下,其促進(jìn)的比率也是微不足道。另外,血清的熱滅活導(dǎo)致的沉淀常常被認(rèn)為是微生物污染,從而給用戶(hù)帶來(lái)不必要的麻煩。
3、我司建議,對(duì)血清進(jìn)行滅活的用戶(hù),需要通過(guò)試驗(yàn)來(lái)證實(shí)其必要性。
三、血清熱滅活應(yīng)該怎么操作?
1、融化血清,并充分混勻其內(nèi)容物。
2、對(duì)照瓶裝等量水,插入溫度計(jì)。
3、將血清瓶和對(duì)照瓶放入56℃水浴箱。
4、當(dāng)溫度達(dá)到56℃,立即開(kāi)始計(jì)時(shí)。
5、每5分鐘,旋轉(zhuǎn)血清瓶一次,輕微規(guī)則搖晃,以使瓶中血清受熱均勻一致。656℃,30分鐘后,立刻去除血清。
注意事項(xiàng):血清滅活時(shí),避免接觸到加熱管,防止受熱不均勻,導(dǎo)致滅活失敗,血清滅活后,冷水浴冷卻。
四、為什么血清滅活后產(chǎn)生大量沉淀?
1、血清滅活后出現(xiàn)的沉淀大多數(shù)是纖維蛋白析出,屬正常現(xiàn)象。滅活過(guò)程多次搖晃使血清受熱均勻可以降低蛋白的析出。
2、當(dāng)血清在未全化凍狀態(tài)時(shí)直接置56℃水浴、滅活過(guò)程中局部受熱過(guò)高、加熱時(shí)間過(guò)長(zhǎng)就會(huì)產(chǎn)生膠狀沉淀,這樣的血清質(zhì)量嚴(yán)重受損,是無(wú)法繼續(xù)正常使用的。
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