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技術文章

維生素K2(發(fā)酵法)液相色譜分析方法

閱讀:6715          發(fā)布時間:2018-9-13

維生素K2(發(fā)酵法)液相色譜分析方法(衛(wèi)計委2016年第8號)

 

A.4 維生素K2含量的測定

A.4.1試劑和材料

A.4.1.1維生素K2標準品(七烯甲萘醌,MK-7)。

A.4.1.2異丙醇:分析純。

A.4.1.3甲醇:色譜純。

A.4.2儀器和設備

A.4.2.1液相色譜儀。

A.4.2.2紫外光檢測器可變波長。

A.4.2.3數(shù)據(jù)處理系統(tǒng):色譜工作站或數(shù)據(jù)處理機。

A.4.3參考色譜條件

推薦的色譜柱及典型操作條件如下表A.1,其他能達到同等分離程度的色譜柱和色譜操作條件均可使用。

A.1色譜柱和色譜操作條件

色譜柱C18 (ODS)柱,柱長150 mm,內徑4.6mm,內裝C18填充物,粒徑5μm或是相當者
柱溫/50
流動相甲醇
流速/ mL/min1.0
檢測波長/nm254
進樣量/ μL10

A.4.4分析步驟

A.4.4.1 試樣溶液處理

精密稱取試樣適量(至0.001 g)于10 mL容量瓶中,加入異丙醇超聲30 min,用異丙醇定容至刻度,搖勻,過0.45 μm濾膜,得上樣試樣。

A.4.4.2 標準品溶液配制

精密稱取七烯甲萘醌標準品適量,用異丙醇溶解并定容,配制成濃度為20 μg/mL的標準品溶液。

A.4.4.3  試樣測定

用標準品和試樣溶液10 µL注入液相色譜儀中測定,以保留時間定性,峰面積外標法定量。

A.4.5結果計算

維生素K2的含量w,單位為微克每克(μg/g),按式(A.1)計算:

   ………………………………………………A.1

式中:

A1——試樣中維生素K2(七烯甲萘醌)對應峰面積;

A2——標準品中維生素K2(七烯甲萘醌)對應峰面積;

c1——進樣標準品中維生素K2(七烯甲萘醌)的濃度,單位為微克每毫升(µg/mL);

V1——供試試樣定容體積,單位為毫升(mL);

m1——試樣的質量,單位為克(g)。

試驗結果以平行測定結果的算術平均值為準。在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的差值不大于算術平均值的10 %。

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