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技術(shù)文章

維生素K2(發(fā)酵法)液相色譜分析方法

閱讀:6670          發(fā)布時(shí)間:2018-9-13

維生素K2(發(fā)酵法)液相色譜分析方法(衛(wèi)計(jì)委2016年第8號)

 

A.4 維生素K2含量的測定

A.4.1試劑和材料

A.4.1.1維生素K2標(biāo)準(zhǔn)品(七烯甲萘醌,MK-7)。

A.4.1.2異丙醇:分析純。

A.4.1.3甲醇:色譜純。

A.4.2儀器和設(shè)備

A.4.2.1液相色譜儀。

A.4.2.2紫外光檢測器可變波長。

A.4.2.3數(shù)據(jù)處理系統(tǒng):色譜工作站或數(shù)據(jù)處理機(jī)。

A.4.3參考色譜條件

推薦的色譜柱及典型操作條件如下表A.1,其他能達(dá)到同等分離程度的色譜柱和色譜操作條件均可使用。

A.1色譜柱和色譜操作條件

色譜柱C18 (ODS)柱,柱長150 mm,內(nèi)徑4.6mm,內(nèi)裝C18填充物,粒徑5μm或是相當(dāng)者
柱溫/50
流動(dòng)相甲醇
流速/ mL/min1.0
檢測波長/nm254
進(jìn)樣量/ μL10

A.4.4分析步驟

A.4.4.1 試樣溶液處理

精密稱取試樣適量(至0.001 g)于10 mL容量瓶中,加入異丙醇超聲30 min,用異丙醇定容至刻度,搖勻,過0.45 μm濾膜,得上樣試樣。

A.4.4.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制

精密稱取七烯甲萘醌標(biāo)準(zhǔn)品適量,用異丙醇溶解并定容,配制成濃度為20 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

A.4.4.3  試樣測定

用標(biāo)準(zhǔn)品和試樣溶液10 µL注入液相色譜儀中測定,以保留時(shí)間定性,峰面積外標(biāo)法定量。

A.4.5結(jié)果計(jì)算

維生素K2的含量w單位為微克每克(μg/g),按式(A.1)計(jì)算:

   ………………………………………………A.1

式中:

A1——試樣中維生素K2(七烯甲萘醌)對應(yīng)峰面積;

A2——標(biāo)準(zhǔn)品中維生素K2(七烯甲萘醌)對應(yīng)峰面積;

c1——進(jìn)樣標(biāo)準(zhǔn)品中維生素K2(七烯甲萘醌)的濃度,單位為微克每毫升(µg/mL);

V1——供試試樣定容體積,單位為毫升(mL);

m1——試樣的質(zhì)量,單位為克(g)。

試驗(yàn)結(jié)果以平行測定結(jié)果的算術(shù)平均值為準(zhǔn)。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的差值不大于算術(shù)平均值的10 %。

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