EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞（彝族）；HYL圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞（彝族）；HYL圖片
形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)
特征特性  該細(xì)胞來(lái)源于一彝族女性的外周血。1994年由中國(guó)科學(xué)院昆明細(xì)胞庫(kù)通過EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。 
培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  15%NBS
傳代方法  1:2傳代；5-6天一次
傳代情況 P5
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 熒光法（-）
STR  -
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

2玉米蛋白    25g
玉米素    5mg
預(yù)混型 BCIP/NBT 溶液    100mL
預(yù)混型丙烯酰胺 - 甲叉雙丙烯干粉 (19:1)    100g
預(yù)混型丙烯酰胺 - 甲叉雙丙烯干粉 (29:1)    100g
預(yù)染蛋白質(zhì)電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (14.4-97.4KD)    10 次
預(yù)染蛋白質(zhì)電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (43.0-200.0 KD)    10 次
預(yù)稀釋 BGG 蛋白標(biāo)準(zhǔn)品    7×1mL
預(yù)稀釋 BSA 蛋白標(biāo)準(zhǔn)品    7×1mL
原釩酸鈉，十二水    25g
Zamboni 固定液    250 mL
Zenker 固定液    250 mLterone EIA Antiserum
Latanoprost EIA Antiserum （100 dtn）Latanoprost EIA Antiserum
Vilogenin （Atlantic salmon） Standard （50 ug）Vilogenin （Atlantic salmon） Standard
9（S）-HpODE （1 mg）9S-hydroperoxy-10E，12Z-octadecadienoic acid； 9（S）-HpODE
Aldehyde Site Assay Reactive Probe （120 uL）Aldehyde Site Assay Reactive Probe
Laemmli Buffer Stock Solution （2X） （10 mL）Laemmli Buffer Stock Solution （2X）
Dihomo-γ-Linolenoyl PAF C-16 （1 mg）1-O-hexadecyl-2-O-（8Z，11Z，14Z-eicosatrienoyl）-sn-glyceryl-3-phosphorylcholine； 1-O-hexadecyl-2-dihomo-γ-Linolenoyl-sn-glycero-3-Phosphocholine； Dihomo-γ-Linolenoyl PAF C-16
2-Arachidonoyl Glycerol （1 mg）5Z，8Z，11Z，14Z-eicosatetraenoic acid， 2-glyceryl ester； 2-AG； 2-Arachidonoyl Glycerol
1-Oleoyl-2-acetyl-sn-glycerol （10 mg）1-O-9Z-octadecenoyl-2-O-acetyl-sn-glycerol； OAG； 1-Oleoyl-2-acetyl-sn-glycerol
Xestospongin C （250 ug）[1R-（1R，4aR，11R，12aS，13S，16aS，23R，24aS）]-eicosahydro-5H，17H-1，23:11，13-diethano-2H，14H-[1，11]dioxacycloeicosino[2，3-b:12，13-b1]dipyridine； XeC|Araguspongine E； Xestospongin C
G6PDH Cofactor （1 ea）G6PDH Cofactor
SPHK Assay Fluorometric Detector （1 ea）SPHK Fluorometric Detector； SPHK Assay Fluorometric Detector
β-Hydroxybutyrate Dehydrogenase （1 ea）β-Hydroxybutyrate Dehydrogenase
Zetterqvist 固定液    250 mL
Zinquin 乙酯    5mg
Z-VAD-FMK(Caspase Inhibitor)    1mg
雜交袋    20 個(gè)
雜交管 (35×100mm)    1個(gè)
雜交管 (35×200mm)    1個(gè)