細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類(lèi)型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。

名稱(chēng)    NCI-H146 [H146]（小細(xì)胞肺癌細(xì)胞） (STR鑒定正確)
別稱(chēng) H146; H-146; NCIH146

種屬 人類(lèi)

年齡（性別） 男性，59歲

組織來(lái)源 肺

生長(zhǎng)特性 懸浮細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 淋巴母細(xì)胞樣

背景描述 Derived from the pleural fluid of a patient with small cell lung cancer; the cells express elevated levels of the 4 biochemical markers characteristic of SCLC: neuron-specific enolase, the brain isoenzyme of creatine kinase, L-dopa decarboxylase and bombesin-like immunoreactivity; the cells stain positively for keratin and vimentin but are negative for neurofilament triplet protein; the cells express relatively high amounts of c-myc mRNA, but no amplification of the gene is detected.

生長(zhǎng)培養(yǎng)基 RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例 1:2-1:3

推薦換液頻率 2~3次/周

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

基因表達(dá)情況 vasopressin negative; oxytocin negative; gastrin releasing peptide negative; vimentin positive by immunostaining; keratin positive by immunostaining; neurofilament triplet protein negative; c-myb mRNA; v-fms mRNA; Ha-ras mRNA; Ki-ras mRNA; N-ras mRNA; c-raf 1 mRNA; myc+; myb+; raf+; ras+; fms+; fes -

注意事項(xiàng) 該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，請(qǐng)注意離心收集細(xì)胞懸液；請(qǐng)勿直接倒掉細(xì)胞培養(yǎng)液。

保藏機(jī)構(gòu) ATCC; HTB-173

使用方法：
收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過(guò)夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細(xì)胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

超級(jí)雜交液 ( 芯片 )10mL  角膜上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子5mL

超級(jí)雜交液 ( 原位雜交 )10mL  膠回收及 PCR 片段純化兩用試劑盒50 次

DNA 探針變性液10mL  膠回收及 PCR 片段純化兩用試劑盒100 次

SSC 溶液 ,20×100mL  堿性膠電泳液 ,10×250mL

SSPE 溶液 ,20×100mL  剪切式勻漿機(jī)1臺(tái)
caspase-3活性檢測(cè)試劑盒分光光度法 20T

caspase-6活性檢測(cè)試劑盒分光光度法 20T、50T、100T

caspase-8活性檢測(cè)試劑盒分光光度法 20T、50T、100T

caspase-9活性檢測(cè)試劑盒分光光度法 20T、50T、100T

細(xì)胞周期檢測(cè)試劑盒微板比色法 100T
NCI-H146 [H146]（小細(xì)胞肺癌細(xì)胞）大鼠賴(lài)氨酰氧化酶樣蛋白2(LOXL2)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠蘭尼定受體1(RYR1)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠3/色氨酸5單加氧酶激活蛋白ζ(YWHAζ)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠蛋白激酶JAK3(Jak3)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠蛋白激酶JAK3(Jak3)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)
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