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當前位置:上海谷研實業(yè)有限公司>>科研細胞>>細胞系>> HELF (胚肺成纖維細胞)

HELF (胚肺成纖維細胞)

參  考  價面議
具體成交價以合同協(xié)議為準

產(chǎn)品型號

品       牌R&D/美國

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時間:2022-04-02 13:38:18瀏覽次數(shù):136次

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號 GOY-01X0279 應用領(lǐng)域 化工
主要用途 僅供科研使用
HELF (胚肺成纖維細胞)公司其它各種產(chǎn)品Tubulin-Tracker Red( 微管紅色熒光探針 )40μL dCTP 溶液,2.5mM2mL
Zinquin 乙酯5mg dCTP 溶液,100mM0.5mL
1400W(iNOS 抑制劑 )2mg DB3.1 感受態(tài)細胞10×100μL
5-Fluorouracil(5- 氟脲嘧啶 )1mL dATP 溶液,2.5mM2mL
Ac-

產(chǎn)品屬性:

產(chǎn)品名稱

HELF (胚肺成纖維細胞)

規(guī)格

1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

貨號

GOY-01X0279

名稱    HELF (胚肺成纖維細胞)
生長特性 貼壁細胞

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

生長培養(yǎng)基 DMEM10% FBS1% P/S

推薦傳代比例 1:3-1:4

推薦換液頻率 2~3/

凍存條件

凍存液:55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度:液氮

培養(yǎng)條件

氣相:空氣,95%;CO25%

溫度:37

冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4 30~60 分鐘-20 30 分鐘* → -80 16~18 小時(或隔夜)液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 –80 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
培養(yǎng)操作:
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37水浴中迅速搖晃解凍,加 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?/span> 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2
)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1.
棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2.
1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3.
6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4.
將細胞懸液按 12 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3
)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1.
細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細胞變圓 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm
離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3.
將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
實驗報告:
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng):
1
、無菌條件下,取出1-3d SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將成1mm3左右大??;
2
、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4放置;
3
、剩下的組織再加入34mL酶消化液,混懸10s,置37消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4
、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10 FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37 5CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5
、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1
、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2
、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4條件下,用0.1Triton X-100透膜15min;
3
PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4
、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4冰箱中孵育細胞過夜;
5
、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37條件下放置1h;
6
、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
DNA 上樣液 ( ),6×10mL  十二烷基磺酸100g

DNA 上樣液 ( ),6×10mL  標記 dUTP 溶液50μL

DNA 上樣液 ( ),6×( 非甘油 )10mL  腎系膜細胞生長因子5mL

DNA 上樣液 ( ),6×( 非甘油 )10mL  神經(jīng)元生長因子5mL

三合一 RNA 上樣液 ( EB) 1.5mL  少突膠質(zhì)細胞生長因子5mL
魚熱休克蛋白90(HSP-90)elisa檢測試劑盒

魚熱休克蛋白70(HSP-70)elisa檢測試劑盒

魚熱休克蛋白40(HSP-40)elisa檢測試劑盒免費代測

魚去甲腎上腺素(NE)elisa檢測試劑盒

魚前列腺素E2(PGE2)elisa檢測試劑盒
HELF (
胚肺成纖維細胞)大鼠γ-半合成酶(γ-GCS)elisa檢測試劑盒

大鼠δ氨基乙酰丙酸脫水酶(ALAD)elisa分析檢測試劑盒

大鼠δ氨基乙酰丙酸脫水酶(ALAD)elisa檢測試劑盒

大鼠δ樣蛋白4(δLL4)elisa檢測試劑盒

大鼠阿黑皮素原(POMC)elisa分析檢測試劑盒


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