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人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；HCT-8 圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；HCT-8 圖片
形態(tài)特性  上皮細(xì)胞
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性  HCT-8與HRT-18是一樣的。 角蛋白免疫過(guò)氧化物酶染色陽(yáng)性。 
培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  胎牛血清，10%
傳代方法  消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。
傳代情況 PN5
凍存條件  *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測(cè) 陰性
STR  Amelogenin:X,Y；CSF1PO:12；D13S317:8,11；D16S539:12,13；D18S51:11,17；D19S433:14,16；D21S11:29,32.2；D2S1338:17,25；D3S1358:17；D5S818:13；D7S820:10,11.3；D8S1179:15；FGA:22；TH01:7,9.3；TPOX:8,11；vWA:18,19
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；HCT-8 圖片細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；HCT-8 圖片質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，*進(jìn)口來(lái)源，*保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；HCT-8 圖片操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

磷酸鹽葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    250克    Phosphate Glucose Peptone Water    用于甲基紅試驗(yàn)
KORSER氏檸檬酸鹽肉湯    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    100克    Korser Citrate Sodium Broth    用于細(xì)菌的枸櫞酸鹽試驗(yàn)
結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    250克    VRBA    用于大腸菌群的檢驗(yàn)
SA瓊脂    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    250克    Salmonella Arizona Agar    亞利桑那沙門氏菌的選擇性分離
疊氮鈉葡萄糖肉湯    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    250克    Azide Dextrose Broth    鏈球菌、腸球菌、糞鏈球菌的增菌培養(yǎng)
KF鏈球菌瓊脂    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    100克    KF Streptococcus Agar    鏈球菌的選擇性分離和計(jì)數(shù)
EVA肉湯    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    250克    EVA Broth    用于鏈球菌的增菌培養(yǎng)
賴氨酸吲哚動(dòng)力培養(yǎng)基    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    250克    LIM Medium    用于鏈球菌的分離培養(yǎng)；細(xì)菌的賴氨酸、吲哚和動(dòng)力復(fù)合生化試驗(yàn)
BETA-SSA瓊脂    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    250克    BETA-SSA Agar    鏈球菌的選擇性分離培養(yǎng)
胰酪胨大豆羊血瓊脂基礎(chǔ)    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    250克    Trypticase Soy Sheep Blood Agar Base    蠟樣芽孢桿菌的溶血測(cè)試驗(yàn)

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；HCT-8 圖片12-161EHA103 農(nóng)桿菌菌種1mL
脫氧膽酸10g
維生素 B121g
柱式動(dòng)物 RNA-DNA 雙提試劑盒50 次
120668I-14mL DNA 離心超濾管 (150-250 KD)1個(gè)
核酸內(nèi)切酶 III (Nth)1000U