公司產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱：丙酮酸脫氫酶β(PDHb)重組蛋白   

物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant Pyruvate Dehydrogenase Beta (PDHb)

PDH-B; PHE1B; PHE1-B; Pyruvate Dehydrogenase(lipoamide)Beta

酶與激酶

相關(guān)產(chǎn)品：
Recombinant Human ARL4C宿主: E.Coli標(biāo)簽: N-terminal His-IF2DI Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Human

Recombinant Human Gremlin 1宿主: E.Coli標(biāo)簽: N-terminal His Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Human

Recombinant Human SDF1宿主: E.Coli標(biāo)簽: N-terminal His Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Human

Recombinant Human RTN3宿主: E.Coli標(biāo)簽: N-terminal His-IF2DI Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Human

標(biāo)簽選擇：

親和標(biāo)簽：蛋白重組表達(dá)過(guò)程中采用親和標(biāo)簽融合表達(dá)有兩方面的作用：一方面是為了使蛋白純化過(guò)程變得更加容易；另一方面是為了促進(jìn)某些不溶性蛋白可溶。蛋白標(biāo)簽可分兩類(lèi)：一類(lèi)是短肽類(lèi)標(biāo)簽；一類(lèi)是長(zhǎng)肽以融合蛋白（fused partner）形式共表達(dá)。使用不同的蛋白標(biāo)簽需要根據(jù)具體案例來(lái)分析。

不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的，大致步驟如下：

真核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟：

a.      選擇表達(dá)載體和宿主細(xì)胞（常用的CHO和HEK293）

b.      表達(dá)載體的構(gòu)建

c.      無(wú)內(nèi)毒素的質(zhì)粒抽提

d.      細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染

e.      表達(dá)小試，條件優(yōu)化

f.       表達(dá)分析和鑒定（SDS-PGAE和WB）

g.      大量表達(dá)

h.      親和純化

i.        檢測(cè)和鑒定

原核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟：

a.      選擇表達(dá)載體

b.      密碼子優(yōu)化

c.      基因合成/亞克隆

d.      轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株

e.      蛋白表達(dá)小試分析

f.       如果蛋白可溶，蛋白親和純化

g.      如果蛋白不可溶，則需要變復(fù)性來(lái)制備可溶蛋白。

h.      鑒定，包括SDS-PAGE和WB鑒定

GZMH蛋白；表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測(cè)

　　誘導(dǎo)表達(dá)成功后，表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測(cè)應(yīng)該順當(dāng)，按一般的實(shí)驗(yàn)步驟做沒(méi)太大的問(wèn)題。

操作步驟 ：

根據(jù)使用量，取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF，使 PMSF 的zui終濃度為 1mM。混勻備用（PMSF 現(xiàn)用現(xiàn)加）。

1、樣品前處理：

a)對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。

b)對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液，再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成 50-100 萬(wàn)細(xì)胞/管，然后再裂解。

c)對(duì)于組織樣品： 把切成細(xì)小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

2、后處理：

將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的蛋白濃度測(cè)定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作

特點(diǎn)：

標(biāo)記：標(biāo)記反應(yīng)簡(jiǎn)單、溫和且很少抑制抗體活性，將與抗體共價(jià)結(jié)合是一種非常簡(jiǎn)便、直接的標(biāo)記方法。

酶標(biāo)記：酶標(biāo)記抗體是將酶與特異性抗體經(jīng)適當(dāng)方法連接而成，其應(yīng)用范圍非常廣泛，結(jié)果即時(shí)可見(jiàn)、敏感性高。

熒光標(biāo)記：熒光基團(tuán)AbFluorTM是新型的熒光標(biāo)記物之一，產(chǎn)品覆蓋350-770nm。不同的AbFluor基團(tuán)經(jīng)恰當(dāng)?shù)募す饪砂l(fā)光， 從而得知抗體的定位和待測(cè)抗原的分布情況，主要用于細(xì)胞分選或高分辨率免疫染色，是一種非常好的亞細(xì)胞水平定位的方法。

Angiopoietin-like 4產(chǎn)品名稱: 生成su相關(guān)蛋白4抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Rabbit

SLCO2A1產(chǎn)品名稱: 溶質(zhì)載體蛋白家族21成員2抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat

GPR30產(chǎn)品名稱: G蛋白偶聯(lián)受體30抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat

CD34產(chǎn)品名稱: CD34單克隆抗體產(chǎn)品別名: bsm-16538M; bsm-41196M; bsm-41197M; bs-2038R; bs-0646R

API5產(chǎn)品名稱: 凋亡因子5抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, GuineaPig

phospho-Smad3 (Ser204)產(chǎn)品名稱: 細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD3抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep

KRT81產(chǎn)品名稱: 細(xì)胞角蛋白81抗體交叉反應(yīng): Human

ZBTB39產(chǎn)品名稱: 鋅指蛋白ZBTB39抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Cow, Horse, Rabbit, Sheep

應(yīng)用類(lèi)型: Other英文名稱: PAX5英文別名: B cell lineage specific activator; B cell lineage CTDSP2產(chǎn)品名稱: 羧基端小結(jié)構(gòu)域磷suanmei2抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep

丙酮酸脫氫酶β(PDHb)重組蛋白人蛋白二硫化物異構(gòu)mei前體(PDI)ELISA試劑盒PDI蛋白二硫化物異構(gòu)mei前體elisamei聯(lián)免疫試劑盒Human Protein disulfide-isomerase precursor,PDI ELISA Kit

人蛋白二硫化物異構(gòu)meiA3(PDIA3)ELISA試劑盒PDIA3蛋白二硫化物異構(gòu)meiA3elisa檢測(cè)試劑盒Human protein disulfide-isomerase A3,PDIA3 ELISA Kit

人蛋白ATP1B4(ATP1B4)ELISA試劑盒ATP1B4蛋白ATP1B4elisa kitHuman ATP1B4 ELISA Kit

人蛋白 DJ-1(PARK7)ELISA試劑盒PARK7蛋白 DJ-1ELISA試劑盒Human Protein DJ-1,PARK7 ELISA kit

人膽suan(CA)ELISA試劑盒CA膽suanelisamei聯(lián)免疫試劑盒Human Cholic acid，CA ELISA Kit