實(shí)驗(yàn)過程：
一、休斯新孢子蟲探針法熒光定量PCR試劑盒試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．產(chǎn)品僅用于科研對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：休斯新孢子蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Neospora hughsi
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據(jù)機(jī)型決定，具體見使用方法）。
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

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產(chǎn)品及特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
Synephrine有絲分裂原活化蛋白激酶14檢測試劑盒20mg

D-果糖;D(-)-Fructose 訂購|咨詢 規(guī)格： 100mg ELISA Kit for Human Serine/arginine-rich splicing factor 1大鼠線粒體解偶聯(lián)蛋白2(UCP2)ELISA試劑盒，英文名：UCP2 ELISA Kit

胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1(IGFBP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)重組人 COL9A1 蛋白 (His 標(biāo)簽)*100(g)

HSP90(Human Heat Shock Protein 90) ELISA Kit  人熱休克蛋白90CAS號：050540 查爾合成酶檢測試盒100gHuman/人Elisa試盒3069407

Arbutin誘導(dǎo)型一化氮合成酶檢測試劑盒20mg

壬(Standard for GC ,>99%(GC)) 質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC ,>99%(GC)  Nonoic acid 胰高血糖素(GC)重組蛋白英文名稱：Recombinant Glucagon (GC)

Ⅰ型膠原α2(COL1α2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)重組人 CHST11 / C4ST-1 蛋白 (His 標(biāo)簽)*100(g)

HSP70(Human Heat Shock Protein 70) ELISA Kit  人熱休克蛋白70CAS號：107959鈣依賴蛋白激酶檢測試盒25gHuman/人Elisa試盒3069429

98%25g25g膽酶(ChE)檢測試劑盒(羥三化鐵微板法)epidermalgrowthfactor receptor varianttypeⅢ

硝地平 質(zhì)量規(guī)格：>99%,CP,AR Nifedipine 人外周血嗜堿性白血病細(xì)胞英文名稱：KU812

Dehydrocholic acidBR，98.5%Bcl2；腺病E1B相互作用蛋白3檢測試盒20mgI型膠原檢測試盒PINT

98%1g1gα淀粉酶(αAMS)檢測試劑盒(硝基水楊法)Cyclin Dependent Kinase 11

醋地孕（標(biāo)準(zhǔn)品） 質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Chlormadinone Acetate 卵巢腫瘤蛋白1(OTUB1)重組蛋白英文名稱：Recombinant Otubain 1 (OTUB1)

全式鈷氨素檢測試盒20mgI型前膠原氨基端肽檢測試盒PICP

98%5g500mg淀粉酶(AMS)檢測試劑盒(淀粉比色法)Cyclin Dependent Kinase 5

大戟二醇 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 ELISA Kit for Human Hematopoietic prostaglandin D synthase小鼠骨骼肌慢肌肌鈣蛋白T(TNNT1)ELISA試劑盒，英文名：TNNT1 ELISA Kit

泛鈷胺素檢測試盒20mgI型前膠原羧基端肽檢測試盒Klotho
休斯新孢子蟲探針法熒光定量PCR試劑盒D半乳糖醛 CAS號： 91510622 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

7木糖紫杉 CAS號： 90332664 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

7木糖苷10脫酰紫杉 CAS號： 90332631 規(guī)格： HPLC≥40%;20mg 訂購|咨詢

(+)松蘿 CAS號： 34769443 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

()薄荷 CAS號： 10458147 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

左旋箭毒堿 CAS號： 436055 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢

紫堇塊莖堿 CAS號： 517566 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢

紫菫定 CAS號： 476697 規(guī)格： HPLC≥95%;10mg 訂購|咨詢

正十二巨大戟 CAS號： 54706706 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

澤蘭黃 CAS號： 520116 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

紫羅蘭 CAS號： 8013909 規(guī)格： HPLC≥98%;0.1ml 訂購|咨詢

支脫皂苷元 CAS號： 511966 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

左旋千金藤啶堿 CAS號： 16562133 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

紫蘇 CAS號： 536594 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

竹紅菌素 CAS號： 123940545 規(guī)格： HPLC≥97%;20mg 訂購|咨詢
使用方法：
一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DN段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個(gè)樣品，必須設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽性對照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）
10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對照，6個(gè)用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好。