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都說是封閉，羊血清究竟封閉的是什么（抗原？）那接下來加一抗怎么又能反應(yīng)結(jié)合？不是封閉了嗎？

封閉的目的是為了減少非特異染色。

這里，允許小編介紹下免疫組化中封閉血清的原理，封閉血清的原理主要有兩點(diǎn)：

*是待檢樣本會非特異性的和蛋白結(jié)合，從而導(dǎo)致背景過高，因此可以用BSA或血清封閉掉這部分非特異性的結(jié)合，從這點(diǎn)看，BSA和血清沒有明顯區(qū)別。

第二是待檢樣本中可能會有Fc受體，可以和抗體恒定區(qū)結(jié)合，與抗體特異性無關(guān)，封閉血清中有抗體，因此用血清可以封閉掉一抗及二抗和樣本Fc受體之間結(jié)合。BSA則無法封閉Fc受體。

所以二抗來源的動物血清封閉的是組織上帶電荷基團(tuán)。因?yàn)榻M織中非抗原抗體反應(yīng)出現(xiàn)的非特異性背景染色，zui常見的原因是蛋白吸附于高電荷的膠元和結(jié)締組織成分上。這并不影響接下來一抗的結(jié)合，因?yàn)檫@種結(jié)合是特異的，親和力遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于因電荷作用的結(jié)合，因此會競爭勝出。

免疫組化中用血清封閉的較多。封閉血清一般選擇和二抗同一來源的（如一抗為兔來源多抗，二抗為山羊抗兔IgG，那封閉液就用山羊血清），血清中動物自身的抗體，預(yù)先能和組織中有交叉反應(yīng)的位點(diǎn)發(fā)生結(jié)合，否則在后面的步驟中如果和二抗發(fā)生結(jié)合，會造成背景。但要注意封閉用血清中不能含有目標(biāo)蛋白，且與一抗來源不同。另外二抗因盡量少選取兔子或老鼠來源的，因?yàn)檫@兩個(gè)在親緣關(guān)系上和人類非常接近，所以產(chǎn)生交叉反應(yīng)的機(jī)會就比較大，從而導(dǎo)致背景比較高。適合選用來源于驢，山羊，綿羊等的二抗，背景相對就很低。

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