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ECL化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒常見(jiàn)問(wèn)題

閱讀：2455 發(fā)布時(shí)間：2019-10-30

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問(wèn)題	原因	方法
白色條帶黑色背景	體系中HRP過(guò)量	進(jìn)一步稀釋HRP 標(biāo)記
膜上有棕色或黃色條帶
背景發(fā)亮
信號(hào)弱或無(wú)信號(hào)	HRP過(guò)量，消耗底物	進(jìn)一步稀釋HRP 標(biāo)記
	抗原或抗體不足	增加抗體
	抗原或抗體不足	使用超級(jí)ECL
	轉(zhuǎn)膜失敗	優(yōu)化轉(zhuǎn)膜條件
	HRP 活性低	測(cè)試HRP 活性：暗室中，將1ul未稀釋的HRP 放入裝有1-2ml的基質(zhì)工作溶液的試管中。幾分鐘內(nèi)，溶液會(huì)立即發(fā)出藍(lán)光。
高背景	HRP過(guò)量，消耗底物	進(jìn)一步稀釋HRP 標(biāo)記
	封閉不充分或使用了不適當(dāng)?shù)姆忾]試劑	優(yōu)化轉(zhuǎn)膜條件
	洗滌不充分	增加洗滌時(shí)間和次數(shù)
	膜過(guò)度曝光	減少曝光時(shí)間
	抗原、抗體過(guò)量	減少抗體上樣量
	抗體特異性差	優(yōu)化抗體特異性
條帶有斑點(diǎn)	轉(zhuǎn)膜失敗	優(yōu)化轉(zhuǎn)膜條件
條帶有斑點(diǎn)	x射線膠片與膜之間有氣泡	去除所有氣泡后，再曝光到膠片上
背景有斑點(diǎn)	形成聚合體	使用前通過(guò)0.2um過(guò)濾器過(guò)濾hrp -偶聯(lián)物
背景有斑點(diǎn)	電泳轉(zhuǎn)移過(guò)程中溫度過(guò)高	控制電泳和轉(zhuǎn)移過(guò)程中的溫度
非特異性條帶	HRP-偶聯(lián)物過(guò)量	進(jìn)一步稀釋hrp -偶聯(lián)物
	SDS導(dǎo)致非特異性蛋白結(jié)合	在免疫檢測(cè)過(guò)程中不要使用SDS
	抗體特異性差	優(yōu)化抗體特異性

愛(ài)必信特色產(chǎn)品線(全部現(xiàn)貨)：
二抗、標(biāo)簽抗體、對(duì)照抗體；WB相關(guān)：ECL發(fā)光液、預(yù)染marker、預(yù)制膠；IHC相關(guān)：二抗試劑盒、組化筆；IP/CoIP試劑盒；細(xì)胞因子、信號(hào)通路調(diào)節(jié)劑；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE；凋亡試劑盒、呼吸爆發(fā)試劑盒；動(dòng)植物提取物，定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白)...

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