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多重?zé)晒饷庖呓M化在移植排異反應(yīng)評估中的應(yīng)用分享：
 

多重?zé)晒饷庖呓M化技術(shù)（mIHC）利用酪氨信號放大技術(shù)（TSA），對不同抗原進行多輪次染色標(biāo)記，可對單一切片進行至多六指標(biāo)七色的染色，對于研究多種細(xì)胞之間的原位相互作用很有幫助，涉及到研究多細(xì)胞或多指標(biāo)之間相互作用的領(lǐng)域都可以采用mIHC的技術(shù)替代傳統(tǒng)的IHC或IF，來獲得更高通量的研究結(jié)果。主要的應(yīng)用領(lǐng)域如下圖所示： 

其中，大多數(shù)應(yīng)用mIHC的研究集中在腫瘤相關(guān)領(lǐng)域，腫瘤微環(huán)境及藥效評估方面應(yīng)用尤其多，之前的文章中小編也已經(jīng)為大家多次分享了相關(guān)應(yīng)用，感興趣的小伙伴們可以查閱之前的文章。 
除了相對熱門的腫瘤領(lǐng)域可以用到mIHC來研究免疫細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞之間的相互作用，其他領(lǐng)域也有很多特別較好的研究成果，今天小編就為大家分享一個mIHC在移植排異反應(yīng)評估中的應(yīng)用案例。 

作者對45例腎臟移植患者的腎臟穿刺樣本進行評估，病例情況為：20例產(chǎn)生抗體介導(dǎo)的排異反應(yīng)（ABMR），20例產(chǎn)生T細(xì)胞介導(dǎo)的排異反應(yīng)（TCMR），5例無明顯排異反應(yīng)。多重?zé)晒饷庖呓M化結(jié)果如下圖所示，作者采用TSA原理的多重?zé)晒饷庖呓M化方法，對穿刺的腎臟組織，進行了NKp46、CD3、CD34和CD163的四標(biāo)五色多染分析，可見清晰可見的結(jié)果。 

接下來作者為驗證mIHC結(jié)果的可靠性，又分別進行了NKp46指標(biāo)的IHC實驗以及CD3和CD163的RT-PCR實驗，結(jié)果如下圖顯示，mIHC所體現(xiàn)的信息與傳統(tǒng)IHC及RT-PCR方法一致性良好，表明mIHC方法提供的數(shù)據(jù)可靠且更直觀。

接下來，作者針對三組對腎臟移植表現(xiàn)不同反應(yīng)的病理樣本進行了細(xì)致的分析，發(fā)現(xiàn)CD34+的白細(xì)胞、CD3+T細(xì)胞，CD163+巨噬細(xì)胞和NKp46+NK細(xì)胞在兩種排異反應(yīng)病理樣本中顯著提高，且TCMR組樣本有更強烈的免疫細(xì)胞募集。

接下來作者又對這些募集來的白細(xì)胞的分布進行了更細(xì)致的分析，發(fā)現(xiàn)免疫細(xì)胞在血管外的分布更多，尤其是TCMR組。

相較于TCMR組募集的白細(xì)胞主要集中于血管外，ABMR組的白細(xì)胞則更多的分布在腎小球內(nèi)，這一結(jié)果也可以很好地被mIHC成像分析所發(fā)現(xiàn)。

除了組間的差異外，腎臟移植的排異反應(yīng)還有很強的個體差異性，如下圖所示。

mIHC方法可以允許在一張切片上同時標(biāo)記多種marker，可以原位的展現(xiàn)多種細(xì)胞之間的相互作用，在臨床科研和疾病診斷中都有很大的潛力，今天小編給大家分析的在腎臟移植排異反應(yīng)研究中的應(yīng)用就是如此，mIHC方法的應(yīng)用，幫助科學(xué)家發(fā)現(xiàn)更精細(xì)的免疫細(xì)胞募集區(qū)域，為探秘排異機制及臨床減輕排異反應(yīng)提供了更多可能性。今天的分享就到這了，感興趣的小伙伴們可以關(guān)注愛必信的多重?zé)晒饷庖呓M化試劑盒及實驗服務(wù)，相信看文章的你們也可以得到這樣漂亮實驗結(jié)果和好的實驗發(fā)現(xiàn)！

【愛必信mIHC服務(wù)】

* 我們可以提供的服務(wù)：
Absin多重?zé)晒饷庖呓M化服務(wù)提供預(yù)實驗驗證-染色-拍照-分析全過程。 
一般情況下，六指標(biāo)七色（含DAPI）的多色免疫組化服務(wù)（芯片達四指標(biāo)五色），樣本涵蓋石蠟切片、冰凍切片及組織芯片（TMA），組織大片請?zhí)峁﹩螇K組織切片，F(xiàn)FPE樣本，厚度3-5um。正式實驗一般每例2張，1張備用。預(yù)實驗樣本數(shù)量根據(jù)預(yù)實驗方案定。

(* 所有抗體指標(biāo)需要您提供)

* 我們可以提供的服務(wù)結(jié)果：

1.五色及以下提供全片200X（相當(dāng)于物鏡20X，目鏡10X）原圖，六七色提供視野200X圖片，選定視野一般默認(rèn)3視野，超過視野單獨收費，收費標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)具體情況訂，提供看圖軟件可在客戶端打開。數(shù)據(jù)上傳網(wǎng)盤1G以內(nèi)，或用U盤寄送1G以上。
2.客戶所指區(qū)域的單細(xì)胞分析結(jié)果：

• 單陽性細(xì)胞占有核細(xì)胞百分比，密度。
• 雙陽性細(xì)胞占有核細(xì)胞百分比，密度。
• 組織面積和特定病理形態(tài)面積計算。
• TMA提供每個芯點的以上定量結(jié)果。

Absin多色試劑盒（abs50032） 

組分信息： SuperNova系列染料（可選）、信號放大反應(yīng)液、鼠兔通用型或者抗兔抗鼠HRP標(biāo)記二抗、抗熒光淬滅封片劑、DAPI 
產(chǎn)品特點： 可快速完成高達六指標(biāo)七色的熒光多標(biāo)記； 染料經(jīng)過優(yōu)化處理，相比普通染料，強度更高，持續(xù)時間更長； 有組化經(jīng)驗即可操作，染色無需特殊儀器，提供詳細(xì)的protocol