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一般細(xì)胞長至80%-90%密度則需要傳代消化，貼壁細(xì)胞傳代前，需要把細(xì)胞用消化試劑從培養(yǎng)容器表面解離出來，細(xì)胞得以分離成單個(gè)懸液傳代至含新鮮培養(yǎng)基的新容器內(nèi)。

細(xì)胞消化常用方法

酶消化法

胰酶。這是用得最多的。一般濃度在0.25-0.5%。作用時(shí)間根據(jù)細(xì)胞種類、作用溫度等因素而變化很大，從幾分鐘到幾十分鐘不等。

0.25%的胰酶作用于單層貼壁的細(xì)胞，在37度條件下，一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清。主要作用于細(xì)胞間。配制時(shí)不能用含鈣、鎂的平衡液，否則影響活性。保存于-20度。

離子螯合劑

不破壞細(xì)胞表面分子，僅與CAMs螯合，因此，如果檢測細(xì)胞表面分子的話，盡量，甚至是一定不要用酶消化法。

EDTA。一般濃度在0.02%左右。作用于細(xì)胞與間質(zhì)，對(duì)細(xì)胞間也有一定作用。注意，它能顯著影響pH值，而且在弱堿性條件下才易溶。因此，配制時(shí)應(yīng)調(diào)節(jié)好酸堿度。它不能被終和。因此，消化下來的細(xì)胞要洗一遍。

物理法

直接吹打或用細(xì)胞刮子將細(xì)胞刮下來。

細(xì)胞消化液

愛必信細(xì)胞消化液使用原料為基因工程方法生產(chǎn)的胰蛋白酶，無動(dòng)物源性，無病毒污染可能性，且內(nèi)毒素水平低于藥典標(biāo)準(zhǔn)（<0.06EU/mL）。可以替代動(dòng)物源性胰蛋白酶。可用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞等原代細(xì)胞。

使用方法：

1、在顯微鏡下觀察細(xì)胞 ，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到 90%，即可傳代。

2、在超凈臺(tái)/安全柜中，吸走培養(yǎng)瓶中舊的培養(yǎng)液，加入 PBS 溶液洗一次，加入細(xì)胞消化液使之*覆蓋皿/瓶底。

3、室溫孵育 4-5 分鐘或 37℃孵育 2-3 分鐘（不同細(xì)胞類型消化時(shí)間略有差異），顯微鏡下觀察到大 部分細(xì)胞邊緣開始脫離皿/瓶底。

4、加入與消化液等倍體積細(xì)胞培養(yǎng)基，用移液器輕輕吹打瓶壁上未*脫離的細(xì)胞，并輕輕吹打混 勻，使細(xì)胞*分散。

5、將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中，1200 rpm 離心 3 min。

6、棄上清，加入對(duì)應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)液，重懸細(xì)胞，按比例進(jìn)行傳代，均勻鋪在培養(yǎng)皿/瓶中，置于 37℃， 5%CO2 條件下培養(yǎng)。

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