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GeneScope | 探索熒光原位雜交技術的起源

閱讀:346      發(fā)布時間:2025-1-14
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在分子生物學和遺傳學的研究中,熒光原位雜交(Fluorescence In Situ Hybridization, FISH)技術是一項革命性的進展。它不僅為我們提供了一種強大的工具來研究基因的結(jié)構(gòu)和功能,還幫助我們深入理解染色體異常與疾病之間的關系。本文將帶您穿越時間的長河,探索FISH技術的起源,以及它是如何發(fā)展成為現(xiàn)代分子生物學中重要的一部分。

 

一、原位雜交技術的誕生

 

原位雜交(In Situ Hybridization, ISH)技術的概念最早可以追溯到20世紀60年代。1969年,科學家們初次報道了使用放射性標記的DNA探針進行原位雜交實驗,這一技術使得研究人員能夠在細胞或組織切片中定位特定的DNA序列。盡管這一技術在當時取得了一定的成功,但由于放射性同位素的安全性和處理難度,限制了它的廣泛應用。

 

二、熒光標記的引入

 

到了20世紀70年代,隨著非放射性標記技術的發(fā)展,特別是生物素和地gao辛等標記物的出現(xiàn),原位雜交技術開始變得更加安全和易于操作。然而,真正的轉(zhuǎn)折點發(fā)生在80年代,當熒光標記技術被引入到原位雜交中,形成了我們現(xiàn)在所知的熒光原位雜交(FISH)技術。這一進步極大地提高了檢測的靈敏度和多重性,使得在同一張切片上同時檢測多個DNA或RNA序列成為可能。

 

三、FISH技術的發(fā)展

 

在90年代,隨著熒光顯微鏡技術的進步和熒光染料的多樣化,F(xiàn)ISH技術迎來了快速發(fā)展期。研究人員開始利用不同顏色的熒光染料來標記不同的探針,從而在同一張切片上進行多重FISH實驗。這使得FISH技術在染色體異常檢測、癌癥研究和基因表達分析等領域得到了廣泛應用。

 

進入21世紀,隨著基因組學和個性化醫(yī)療的發(fā)展,F(xiàn)ISH技術的應用范圍進一步擴大?,F(xiàn)代FISH技術不僅能夠檢測染色體的數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常,還能夠精確地定位基因在染色體上的位置,為疾病的診斷和治療提供了重要信息。此外,F(xiàn)ISH技術也被用于監(jiān)測細胞周期、研究基因表達的動態(tài)變化,以及探索細胞分化和發(fā)育過程中的基因調(diào)控機制。

 

四、現(xiàn)代FISH技術的應用

 

熒光原位雜交技術從最初的概念到如今的廣泛應用,經(jīng)歷了幾十年的發(fā)展和完善。它不僅極大地推動了我們對基因和染色體的認識,還為疾病的診斷和治療提供了強有力的工具。作為FISH技術的產(chǎn)品經(jīng)理,我們自豪地見證了這一技術的成長,并期待它在未來的科學研究和臨床應用中發(fā)揮更大的作用。隨著技術的不斷進步,我們相信FISH技術將繼續(xù)為我們揭開生命奧秘的更多篇章。

 

五、不同原位雜交技術的區(qū)別

 

同位素原位雜交(Radioactive In Situ Hybridization, RISH)、地gao辛原位雜交(Digoxigenin In Situ Hybridization, DIG-ISH)和熒光原位雜交(Fluorescence In Situ Hybridization, FISH)都是用于檢測和定位核酸序列的技術,但它們在標記物、檢測方法和應用領域上有所不同。以下是這三種技術的實驗周期和技術區(qū)別:

 

同位素原位雜交(RISH)

 

實驗周期:

RISH的實驗周期通常較長,因為涉及到放射性同位素的使用,包括標記探針的制備、雜交、洗滌、曝光等步驟。曝光時間可能需要幾天到幾周,取決于所使用的放射性同位素和信號的強度。

 

技術特點:

- 使用放射性同位素(如^32P或^35S)標記的探針;

- 高靈敏度和特異性,適合于低豐度mRNA的檢測;

- 需要特殊的設備和安全措施來處理放射性物質(zhì);

- 結(jié)果通常通過放射自顯影來可視化,不適合多重檢測;

- 檢測指標數(shù)量:RISH通常一次只能檢測一個指標,即一個特定的核酸序列。這是因為放射性標記的探針只能與一個特定的互補序列結(jié)合,并且放射性信號的檢測通常不適用于多重檢測。

 

地gao辛原位雜交(DIG-ISH)

 

實驗周期:

DIG-ISH的實驗周期相對較短,通常在幾天內(nèi)可以完成。步驟包括探針的標記、雜交、洗滌、酶標記的抗體檢測和顯色。

 

技術特點:

- 使用地gao辛(DIG)標記的探針,這是一種非放射性的標記物;

- 通過酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)的原理,使用抗DIG抗體和酶(如過氧化物酶或堿性磷酸酶)進行信號放大和檢測;

- 適合于組織切片和細胞的核酸檢測;

- 結(jié)果通過顯色底物來可視化,不適合多重檢測;

- 檢測指標數(shù)量:DIG-ISH同樣主要限于一次檢測一個指標。雖然可以通過改變探針和相應的抗體來檢測不同的序列,但在一次實驗中同時檢測多個指標是不常見的。

 

熒光原位雜交(FISH)

 

實驗周期:

FISH的實驗周期也相對較短,通常在幾天內(nèi)可以完成。步驟包括探針的標記、雜交、洗滌和熒光信號的檢測。

 

技術特點:

- 使用熒光標記的探針,如熒光素Cy3、Cy5;TSA染料等;

- 高靈敏度和多重檢測能力,可以在同一樣本中檢測多個核酸序列;

- 結(jié)果通過熒光顯微鏡來可視化,適合于定量分析和圖像分析;

- 需要避免光漂白和熒光信號的重疊;

- 檢測指標數(shù)量:FISH技術在多重檢測方面具有明顯優(yōu)勢。通過使用不同顏色的熒光標記,可以在一次實驗中檢測多個核酸序列。例如,可以使用不同顏色的熒光探針來標記不同的染色體或基因,從而同時檢測多個指標。理論上,F(xiàn)ISH可以檢測的指標數(shù)量只受限于熒光顯微鏡的檢測能力和可用的熒光通道數(shù)量?,F(xiàn)代的多重FISH技術,如光譜FISH(spectral FISH)和多色FISH,可以同時檢測多達幾十個不同的核酸序列。

 

總結(jié)

 

-靈敏度:RISH通常具有最高的靈敏度,適合于低豐度目標的檢測;

-多重檢測:FISH較適合于多重檢測,可以同時檢測多個核酸序列;

-安全性:DIG-ISH和FISH都是非放射性的,操作更安全,不需要特殊的放射性物質(zhì)處理設施;

-可視化:FISH的結(jié)果可以直接通過熒光顯微鏡觀察,而RISH和DIG-ISH需要額外的顯影或顯色步驟。

 

在選擇技術時,需要考慮實驗的具體需求,包括所需檢測的指標數(shù)量、樣本類型、實驗成本和可用設備等因素。

 

【小愛新品好物速遞】

 

原位雜交(in situ hybridization)技術已經(jīng)被廣泛應用于檢測目標蛋白或DNA分子在細胞或組織切片上的位置和數(shù)量,但對于大部分目標RNA分子的檢測,傳統(tǒng)方法由于特異性和靈敏度無法兼顧,通常無法得到好的檢測結(jié)果。

 

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特色產(chǎn)品:雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...

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