一、背景介紹
Ni-IDA Pharose FF是含亞氨基二乙酸(iminodiacetic acid, IDA)基團(tuán)的金屬螯合填料，以瓊脂糖微球?yàn)榛|(zhì)，通過活化偶聯(lián)亞氨基二乙酸(IDA)，再螯合Ni2+。適用于大部分帶組氨酸標(biāo)簽(His-tag)蛋白的親和層析。
Ni-NTA Sepharose FF是含次氮基三乙酸(NTA)基團(tuán)的金屬螯合填料， 以瓊脂糖微球?yàn)榛|(zhì)，通過活化偶聯(lián)次氮基三乙酸(NTA)，再螯合Ni2+。與亞氨基二乙酸(IDA)相比，具有更好的螯合劑、還原劑、堿性的耐受性。主要用于帶組氨酸標(biāo)簽(His-tag)蛋白的親和層析。
圖1 Ni-IDA瓊脂糖凝膠FF系列使用流程圖
圖2 Ni-NTA瓊脂糖凝膠FF系列使用流程圖
二、標(biāo)簽蛋白純化填料參數(shù)
類別 | Ni-IDA瓊脂糖凝膠FF | Ni-NTA瓊脂糖凝膠FF |
基質(zhì) | 6%交聯(lián)瓊脂糖 | |
配基 | 亞氨基二乙酸，~30μmol Ni2+/mL | 次氮基三乙酸，~17μmol Ni2+/mL |
粒徑范圍a | 45~165μm | |
平均粒徑 | ~90μm | |
動(dòng)態(tài)結(jié)合載量b | ≥40mg/mL帶組氨酸標(biāo)簽蛋白 | |
推薦工作流速 | 60~300cm/h | |
最大流速與壓力 | ＞1500cm/h，0.5MPa | |
使用 pH | 4~8.5（推薦的工作pH），3~12（長(zhǎng)期穩(wěn)定）；2~14（短期穩(wěn)定） | |
化學(xué)穩(wěn)定性 | 在以下溶液中穩(wěn)定：常用的水相緩沖液、1mol/L氫氧化鈉、8mol/L尿素、6mol/L鹽酸胍、70%乙醇等 | |
注：
a：90%體積以上的微球在此粒徑范圍；
b：DBC10%測(cè)試條件為：10%流穿，大腸桿菌表達(dá)帶組氨酸標(biāo)簽的重組蛋白，6min停留時(shí)間。
三、應(yīng)用數(shù)據(jù)：
圖3 Lane M： Marker
Lane 1 ：Start material
Lane 2: Flowthrough 1
Lane 3: Flowthrough 2
Lane 4: Elution (20 mM Imidazole)
Lane 5: Elution (50 mM Imidazole)
Lane 6: Elution (100 mM Imidazole)
Lane 7: Elution (200 mM Imidazole)
Lane 8: Elution (300 mM Imidazole)
Lane 9: Elution (500 mM Imidazole)
填料： Ni-IDA 瓊脂糖凝膠FF（重力預(yù)裝柱）（Cat: abs91007-G），1mL
樣品：his6 -tagged recombinant Streptococcus Protein G produced in E. coli
結(jié)合緩沖液：20mM PB, 150mM NaCl, pH7.4
洗脫緩沖液：20mM PB, 150mM NaCl, 20-500 mM Imidazole, pH7.4
圖4 填料：Ni-NTA 瓊脂糖凝膠FF（中壓預(yù)裝柱）（Cat: abs91008-M），1mL
樣品：his6 -tagged recombinant Streptococcus Protein G produced in E. coli
結(jié)合緩沖液：20mM PB, 150mM NaCl, pH7.4
洗脫緩沖液：20mM PB, 150mM NaCl, 20-500 mM Imidazole, pH7.4
表 NTA系列?屬螯合填料的耐受性
類型 | Ni-NTA 瓊脂糖凝膠FF |
螯合劑 1 mM EDTA |
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螯合劑 2 mM EDTA |
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螯合劑 5 mM EDTA |
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螯合劑 10 mM EDTA |
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還原劑 20 mMDTT |
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還原劑 20 mM BME |
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還原劑 5 mM TCEP |
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還原劑 20 mM TCEP |
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還原劑 10 mM GSH |
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變性劑 8 M 尿素 |
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變性劑 6 M 鹽酸胍 |
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去污劑 2% 曲拉通 X-100 |
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去污劑 2% 吐溫 20 |
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去污劑 2% 吐溫 80 |
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堿 1 M 氫氧化鈉 |
|
四、愛必信標(biāo)簽蛋白純化填料產(chǎn)品信息
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
abs91007-F | Ni-IDA瓊脂糖凝膠FF | 10mL/100mL |
abs91007-M | Ni-IDA瓊脂糖凝膠FF(中壓預(yù)裝柱) | 1mL/5mL |
abs91007-G | Ni-IDA瓊脂糖凝膠FF(重力預(yù)裝柱) | 1mL/5mL |
abs91008-F | Ni-NTA瓊脂糖凝膠FF | 10mL/100mL |
abs91008-M | Ni-NTA瓊脂糖凝膠FF(中壓預(yù)裝柱) | 1mL/5mL |
abs91008-G | Ni-NTA瓊脂糖凝膠FF(重力預(yù)裝柱) | 1mL/5mL |
Absin產(chǎn)品線：
爆款產(chǎn)品：爆款試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測(cè)、殘留檢測(cè)、多因子檢測(cè))；細(xì)胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細(xì)胞因子)、分化試劑盒；分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒)；化合物大包裝；輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...
特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...
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