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背景介紹

裸露的RNA是帶負電荷的親水性大分子，因為細胞膜的靜電排斥，難以進入細胞，且易被無處不在的RNA酶快速降解，所以需要保護性外殼才能進入細胞。細胞膜的組成主要是脂質，利用脂質囊泡包封RNA穿過細胞膜并將RNA釋放到細胞質中。囊泡應該是一種帶正電的脂質，才能夠結合帶負電的RNA。

然而，由永jiu性陽離子脂質組成的囊泡由于能與帶負電的細胞膜發(fā)生靜電作用而引起細胞毒性，脂質結構才能夠對內體酸性環(huán)境響應而帶正電荷的分子。

脂質納米粒結構

LNP通常由四種關鍵成分組成：可離子化的陽離子脂質、磷脂（兩性離子脂質）(PL)、膽固醇和PEG化脂質。

脂質納米粒遞送機制

脂質納米粒(LNP)作為mRNA的傳遞系統(tǒng)，其作用機制涉及多個步驟，確保mRNA安全有效地遞送到目標細胞并表達蛋白。在LNP中，可電離的陽離子脂質發(fā)揮著重要作用，因為它可以帶正電荷低于其Ka以介導在自組裝成LNP期間負載帶負電荷的RNA，在中性pH下不帶電以最大限度地減少毒性，并在細胞吸收后再次帶正電荷以促進內體逃逸隨著內體pH降低。膽固醇和PEG脂質的變體已被證明可以調節(jié)LNP物理性質、納米結構和最終功效。兩性離子磷脂通常被稱為“輔助脂質"。LNPs在保護mRNA、促進細胞內傳遞、以及激活免疫反應方面發(fā)揮關鍵作用。

LNP轉染實驗步驟

下述轉染步驟中為6孔板單孔參考條件。對于其他培養(yǎng)形式，請參考表1。

1、mRNA 預混液制備

將2.5ug mRNA（濃度為1ug/uL）與60uL Buffer混合。

2、mRNA-easyLNP復合物

將62.5uL mRNA預混液與62.5uL easyLNP納米混懸液混合，渦旋2-3s，混勻。

3、加入細胞

將125uL mRNA-easyLNP復合物加入細胞，輕輕晃動使均勻分散。

4、分析時間

培養(yǎng)24-48h后分析。

表1 根據(jù)每孔使用的細胞培養(yǎng)容器的mRNA轉染指南

實驗示意圖：

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