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目錄:愛(ài)必信(上海)生物科技有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)>>細(xì)胞檢測(cè)>> abs50001Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒

Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
  • Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
參考價(jià) 540
訂貨量 ≥1KIT
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
540
≥1KIT
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 品牌 absin
  • 型號(hào) abs50001
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 所在地 上海市
屬性

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更新時(shí)間:2025-03-24 18:02:59瀏覽次數(shù):3382評(píng)價(jià)

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 25T;50T;100T
貨號(hào) abs50001 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合
Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒包含3個(gè)組分,分別為AnnexinV-FITC、10×Binding Buffer、Propidium Iodide

描述:

在正常細(xì)胞中,磷脂酰絲an酸只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè),細(xì)胞發(fā)生凋亡最早期,膜磷脂酰絲an酸(PS)由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè),這一變化早于細(xì)胞皺縮、染色質(zhì)濃縮、DNA片斷化和細(xì)胞膜的通透性增加等凋亡現(xiàn)象。Annexin V是一種磷脂結(jié)合蛋白,與磷脂酰絲an酸有高度親和力,故可通過(guò)細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲an酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V被作為檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一種核酸染料, 它不能透過(guò)完整的細(xì)胞膜,但凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞由于細(xì)胞膜通透性的增加,PI 能夠透過(guò)細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染紅。因此將Annexin V 與PI 匹配使用,就可以將處于不同凋亡時(shí)期的細(xì)胞區(qū)分開(kāi)來(lái)。


操作步驟:

貼壁細(xì)胞需用 0.25%的yi酶消化。注意過(guò)度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加 2%的BSA可防止消化過(guò)度。如果用含EDTA的yi酶消化時(shí),注意必須清除EDTA:在標(biāo)記前用 1×PBS或 1×binding buffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
(1) 用去離子水將 10×Binding Buffer 稀釋成 1×Binding Buffer;
(2) 細(xì)胞收集:懸浮細(xì)胞收集:離心 5 分鐘;貼壁細(xì)胞:用不含EDTA的yi酶消化收集后( 注:yi酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰絲an酸與Annexin V-FITC 的結(jié)合),在室溫中,2000rpm 離心 5~10 分鐘,收集細(xì)胞;
(3) 細(xì)胞洗滌:用預(yù)冷 1×PBS(4℃)重懸細(xì)胞一次,2000rpm 離心 5~10分鐘,棄上清洗滌細(xì)胞;
(4) 加入 300μL 的 1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞;
(5) Annexin V-FITC 標(biāo)記:加入 5μL 的 Annexin V-FITC 混勻后,避光,室溫孵育 15 分鐘;
(6) PI 標(biāo)記:上機(jī)前 5 分鐘再加入 5μL 的 PI 染色。
(7) 上機(jī)前,補(bǔ)加 200μL 的 1×Binding Buffer。
注意:每個(gè)反應(yīng)體系建議細(xì)胞數(shù)為1×104至1×106個(gè)


操作說(shuō)明:

(1) 使用前低速離心,以免液體積存管蓋和管壁;
(2) 本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測(cè);
(3) PI(propidium iodide,溴化丙錠)有毒性,能通過(guò)皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
(4) Annexin V-FITC 和 PI 是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(5) 整個(gè)操作過(guò)程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在 4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(6) 在細(xì)胞洗滌的最后一步,請(qǐng)盡量將上清棄凈,以免 PBS 殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(7) 為防止熒光衰變,宜在 1 小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
(8) PI 染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高,建議首先進(jìn)行Annexin V-FITC 染色,最短可在上機(jī)前 5 分鐘再加入 PI 染色。

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