近年來，阻礙人類健康長壽的第*大殺手就是疾病，例如癌癥，是目前難攻克的疾病之一。疾病研究和藥物開發(fā)也一直是生命科學(xué)領(lǐng)域的專家學(xué)者不斷攻克的領(lǐng)域。而目前的研究顯示，人類的大多數(shù)疾病都會與細(xì)胞因子表達異常引起信號通路異常有關(guān)。

報告基因對于基因表達的研究來說是非常有用的工具，它可以代替要研究的目的基因，從而幫助我們了解目的基因的信號通路和相關(guān)的疾病。熒光素酶是常用的報告基因，使用光度計和化學(xué)發(fā)光功能的微孔板讀板機我們可以很容易的檢測到熒光素酶，另一方面，由于在細(xì)胞實驗中其背景較低，因此具有很高的靈敏度。我們通常用螢火蟲熒光素酶表達水平高低反映出我們感興趣的基因在系統(tǒng)中的地位。而海腎來源的熒光素酶則更常在多熒光實驗中作為第二種報告基因，來規(guī)范化多種在不同樣本中變化較大的指標(biāo)如轉(zhuǎn)染效率，細(xì)胞活力等。

NF- κB是參與細(xì)胞進程中許多基因表達的“主要調(diào)節(jié)者”，如炎癥，免疫，分化，增殖和凋亡。腫瘤壞死因子α (TNF- α)可以激活細(xì)胞信號通路來降解NF- κB的抑制劑，從而促使其釋放并進入核內(nèi)，調(diào)節(jié)數(shù)百目的基因的表達。NF- κB通路的紊亂可以誘發(fā)多種疾病，如多發(fā)性硬化病，糖尿病，阿爾茲海默病等，因此利用合適的工具加深我們對NF- κB通路的理解是十分必要的。

SpectraMax® DuoLuc™ Reporter 試劑盒可以對哺乳動物細(xì)胞中的螢火蟲和海腎熒光素酶進行高靈敏度的定量。依次向微板孔中加入兩種適量的反應(yīng)試劑即可檢測熒光。這種雙熒光信號檢測系統(tǒng)可以在歸一化檢測熒光信號(螢火蟲熒光)的同時提供持續(xù)表達的對照熒光信號(海腎熒光)。運用SpectraMax® iD5 多功能微孔板讀板機、注射器系統(tǒng)和 SmartInject™ 技術(shù)可以將實驗條件*優(yōu)化。在這里我們將展示如何在哺乳動物細(xì)胞模型中， 通過雙熒光報告檢測系統(tǒng)和SpectraMax iD5 微孔板讀板機來檢測核轉(zhuǎn)錄因子κB (NF- κB)的活性。