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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 |
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| 參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間：2025-02-18 17:14:09瀏覽次數(shù)：300
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | GOY-01X0423 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 產(chǎn)品僅供科研使用 |
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| RKO-AS45-1 (結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0423 |
商品介紹：
名稱 RKO-AS45-1 (結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞) 別稱RKO-AS-45-1; RKOAS451; RKO_AS45 種屬人類 年齡（性別）不詳 組織來(lái)源結(jié)腸癌，整合起動(dòng)GADD45a表達(dá)載體的CMV啟動(dòng)子 生長(zhǎng)特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 背景描述人的cDNA中編碼GADD45的開放閱讀框克隆到表達(dá)載體pCMV.3中，轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌細(xì)胞RKO，建立了RKO-AS45-1細(xì)胞株。RKO-AS45-1細(xì)胞含有穩(wěn)定整合巨細(xì)胞病毒(CMV)啟動(dòng)子的表達(dá)載體，RKO-AS45-1細(xì)胞系和它的母系RKO一起可用于GADD45對(duì)DNA修復(fù)、凋亡和藥物敏感性研究。 生物安全等級(jí)2 [Cells Contain CMV viral sequences] 生長(zhǎng)培養(yǎng)基MEM＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 基因表達(dá)情況p53+ (underexpressed) |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
ADIPOR2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
ARPC1A 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CLVS1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
PNMA1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
NTM 基因全長(zhǎng)ORF克隆
KATNA1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
ST6GALNAC3 基因全長(zhǎng)ORF克隆
NAPB 基因全長(zhǎng)ORF克隆
TSPAN33 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CEBPE 基因全長(zhǎng)ORF克隆
RKO-AS45-1 (結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞) 1 管 JM109大腸桿菌 JM109 E.coli Strain -80℃保存
2 ug pRLuc-N2 pRLuc-N2 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
100mL 病毒沉淀劑 Virus Precipitation Reagent 4℃保存
2 ug pcDNA3.1/V6-His B pcDNA3.1/V6-His B 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
0.1%呂氏堿性美藍(lán)染色液 5ml*6支/盒
1g 次甲基綠 Methyl Green B 常溫干燥保存
50T 牛副流感病毒PCR檢測(cè)試劑盒 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
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