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STO (小鼠胚成纖維細(xì)胞)

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更新時間:2025-02-19 18:01:12瀏覽次數(shù):291

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產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號 GOY-01X0219 應(yīng)用領(lǐng)域 化工
主要用途 產(chǎn)品僅供科研使用    
STO (小鼠胚成纖維細(xì)胞)的相關(guān)*:動物組織肌質(zhì)網(wǎng)粗提分離試劑盒 10次
動物組織活性肌質(zhì)網(wǎng)分離試劑盒 10次
動物組織高質(zhì)純化肌質(zhì)網(wǎng)分離試劑盒 10次
動物組織肌質(zhì)網(wǎng)橫小管(T Tube)分離試劑盒 10次
動物組織肌質(zhì)網(wǎng)三聯(lián)體(TRIAD)分離試劑盒 10次
動物細(xì)胞核分離試劑盒 50次

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品屬性: 

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號

STO (小鼠胚成纖維細(xì)胞)

1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

GOY-01X0219

商品介紹:

名稱    STO (小鼠胚成纖維細(xì)胞) 

種屬小鼠

年齡(性別)胎兒

組織來源胚胎

生長特性貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣

背景描述STO細(xì)胞一般作為飼養(yǎng)層細(xì)胞;STO細(xì)胞在體外若經(jīng)長期連續(xù)傳代,常會產(chǎn)生胞質(zhì)空泡。

生物安全等級1

生長培養(yǎng)基DMEM10% FBS1% P/S

推薦傳代比例1:3-1:4

推薦換液頻率2~3/

凍存條件

凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度:液氮

培養(yǎng)條件

氣相:空氣,95%CO25%

溫度:37℃

冷凍保存細(xì)胞之方法?

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

88.jpg

實驗要點及說明:

1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;

2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;

3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;

4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;

5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

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STO (小鼠胚成纖維細(xì)胞)2 ug pTYB 4 pTYB 4 低溫運輸,-20℃保存

50次 柱式毛發(fā)DNAout Column Hair DNAOUT 常溫保存(蛋白K溶液需要-20℃保存)

2 ug pEGFP-Mem pEGFP-Mem 低溫運輸,-20℃保存

GYP白亞瓊脂培養(yǎng)基 GYP Medium 250g

5g 胸腺核苷 Thymidine 室溫干燥避光保存

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100次 雙熒光素報告基因檢測試劑盒 Dual Luciferase Assay Kit -20℃或-80℃避光保存

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