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詳細(xì)介紹
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 大鼠脊髓成纖維細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1191 |
商品介紹：
名稱 大鼠脊髓成纖維細(xì)胞 2.組織來源：脊髓組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介： 大鼠脊髓成纖維細(xì)胞分離自脊髓組織；脊髓是細(xì)細(xì)的管束狀的神經(jīng)結(jié)構(gòu)，位于脊柱的椎管內(nèi)且被脊椎保護(hù)；是源自腦的中樞神經(jīng)系統(tǒng)延伸部分。中樞神經(jīng)系統(tǒng)的細(xì)胞依靠復(fù)雜的聯(lián)系來處理傳遞信息。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的神經(jīng)信息。人和脊椎動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一部分，在椎管里面，上端連接延髓，兩旁發(fā)出成對的神經(jīng)，分布到四肢、體壁和內(nèi)臟。脊髓的內(nèi)部有一個H形（蝴蝶型）灰質(zhì)區(qū)，主要由神經(jīng)細(xì)胞構(gòu)成；在灰質(zhì)區(qū)周圍為白質(zhì)區(qū)，主要由有髓神經(jīng)纖維組成；脊髓是許多簡單反射的中樞。脊髓兩旁發(fā)出許多成對的神經(jīng)（稱為脊神經(jīng)）分布到全身皮膚、肌肉和內(nèi)臟器官。脊髓是周圍神經(jīng)與腦之間的通路，也是許多簡單反射活動的低級中樞。按脊神經(jīng)的出入可把脊髓也分為相應(yīng)的31節(jié)，31對脊神經(jīng)就是由不同的脊椎發(fā)出的。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來；成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的脊髓成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。脊髓成纖維細(xì)胞在生理條件下的主要功能包括：構(gòu)造和維持組織的正常形態(tài)；合成和釋放細(xì)胞外基質(zhì)；組織損傷后及時大量聚集修復(fù)損傷組織。 5.方法簡介： 實驗室分離的大鼠脊髓成纖維細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的大鼠脊髓成纖維細(xì)胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-R167 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 傳代特性可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
MMP-14 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
Pleiotrophin / PTN 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽
Pleiotrophin / PTN 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
MDK / NEGF2 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽
E-Cadherin 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
eIF2a 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶Myc標(biāo)簽
CD137 / 4-1BB / TNFRSF9 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶HA標(biāo)簽
大鼠 BMPR1A 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
小鼠 SIRT3 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽
小鼠 SIRT3 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
大鼠脊髓成纖維細(xì)胞N-叔丁氧羰基-N'-氧蒽基-L-天門冬酰 98%間二甲苯 99.0%Anti-Phospho-SGK1 (Ser422) /FITC 熒光素標(biāo)記化糖皮質(zhì)調(diào)節(jié)激1抗體IgG
Boc-L-天冬4-環(huán)己酯 99%間二甲苯 CP,95.0% Anti-Phospho-SGK1 (Thr256)/FITC 熒光素標(biāo)記化糖皮質(zhì)調(diào)節(jié)激1抗體IgG
Boc-L-天冬4-甲酯 98%間二甲苯 AR,98%Anti-Shadow/SPRN/FITC 熒光素標(biāo)記新朊蛋白/朊蛋白相關(guān)蛋白/沙杜（Shadoo）蛋白抗體IgG
Boc-L-賴 98%間二甲苯標(biāo)準(zhǔn)溶液1mg/ml,溶劑:甲,水質(zhì)分析Anti-Shank1/FITC 熒光素標(biāo)記shank-1抗體IgG
BOC-D-脯 98%鄰二甲苯 Standard for GC,≥99% (GC)Anti-SHBG /FITC 熒光素標(biāo)記性結(jié)合球蛋白抗體IgG
BOC-L-甲酯 99%鄰二甲苯 for HPLC,≥96.0% (GC)Anti-Shh/FITC 熒光素標(biāo)記Shh信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路膜蛋白受體抗體IgG
O-芐基-L- 98%鄰二甲苯 CPShiga-like toxin IIe variant subunit A/FITC 熒光素標(biāo)記抗豬水腫病大腸桿菌志賀樣素Ⅱ型突變體（O139菌株）抗體IgG
BOC-L-羥脯 98%鄰二甲苯 98.0%Anti-SHC/FITC 熒光素標(biāo)記SH2結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)化蛋白1抗體IgG
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