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詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| hFOB 1.19 (SV40轉染成骨細胞) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0351 |
商品介紹：
名稱 hFOB 1.19 (SV40轉染成骨細胞) 別稱hFOB1.19; hFOB 種屬人類 年齡（性別）胎兒 組織來源骨；成骨細胞；以SV40巨細胞抗原轉染 生長特性貼壁細胞 細胞形態(tài)多細胞形態(tài) 背景描述hFOB 1.19細胞是在0.6mg/mL新霉素G418存在下，用溫度敏感的表達載體pUCSVisA58轉染自然流產(chǎn)的胎兒四肢組織建立的細胞系。在許可溫度33.5℃下細胞分裂很快，而在限制溫度39.5℃下細胞極少分裂或不分裂。hFOB 1.19細胞具有分化為表達造骨細胞表型的成熟造骨細胞的能力；hFOB 1.19細胞提供了一個同質(zhì)化的快速增殖模型系統(tǒng)，用于研究正常人造骨細胞的分化、造骨細胞生理和激素、生長因子和對造骨細胞的功能及分化有影響的細胞因子。 生物安全等級2 [Cells contain SV40 viral sequences] 生長培養(yǎng)基DMEM/F12＋0.3mg/ml G418＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：34℃ 抗原表達情況SV40 T antigen 基因表達情況alkaline phosphatase 注意事項該細胞培養(yǎng)難度較高；培養(yǎng)溫度為度：33.5℃-34℃；培養(yǎng)基中添加G418。 |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
KLC4 基因全長ORF克隆
NR1D1 基因全長ORF克隆
GALNTL6 基因全長ORF克隆
TMPRSS13 基因全長ORF克隆
SNCAIP 基因全長ORF克隆
ARHGEF3 基因全長ORF克隆
DYNC1LI1 基因全長ORF克隆
RGS11 基因全長ORF克隆
ENTPD8 基因全長ORF克隆
SH2D4A 基因全長ORF克隆
hFOB 1.19 (SV40轉染成骨細胞) 100mL TAPS Buffer,0.2M,pH8.5 TAPS Buffer,0.2M,pH8.5 常溫保存
10次 ConA 糖蛋白分離試劑盒 Glycoprotein Isolation Kit （ConA） -20℃保存
2 ug pSTAT3-TA-Luc pSTAT3-TA-Luc 低溫運輸，-20℃保存
50次 M膜結合DNA清除試劑盒 Membrane-Bound DNA Erasol -20℃保存，通用洗柱液和RNA洗脫液可以室溫保存
2 ug pCMV-SPORT6 VAMP2 pCMV-SPORT6 VAMP2 低溫運輸，-20℃保存
紅葡萄糖肉湯 Phenol Red Dextrose Broth 250g
100g Potassium Chloride 室溫干燥保存
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