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293T/17 (胚腎細(xì)胞)

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更新時(shí)間:2025-02-26 14:08:20瀏覽次數(shù):316

聯(lián)系我們時(shí)請(qǐng)說(shuō)明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號(hào) GOY-01X0465 應(yīng)用領(lǐng)域 化工
主要用途 產(chǎn)品僅供科研使用    
293T/17 (胚腎細(xì)胞) 的相關(guān)*:細(xì)胞ERK蛋白表達(dá)比色法定量檢測(cè)試劑盒 10/50 次
細(xì)胞ERK蛋白表達(dá)熒光定量檢測(cè)試劑盒 10/50 次
ERK蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒 5次
ERK蛋白免疫共沉淀分析試劑盒 5次
ERK蛋白表達(dá)ELISA定量檢測(cè)試劑盒 25次
細(xì)胞GSK-3ALPHA蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測(cè)試劑盒 10/20次

詳細(xì)介紹

冷凍保存細(xì)胞之方法?

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí), 以防止冰晶過(guò)大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

QQ截圖20210907103850.png

產(chǎn)品屬性:  

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號(hào)

 293T/17 (胚腎細(xì)胞)

1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

GOY-01X0465

商品介紹:

名稱    293T/17 (胚腎細(xì)胞)    

別稱HEK 293T/17; 293T/17

種屬人類

年齡(性別)胎兒

組織來(lái)源腎

生長(zhǎng)特性貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣

背景描述293T/17細(xì)胞株是293T細(xì)胞株的衍生株,293T293 [HEK-293]細(xì)胞株插入了SV40 T-antigen的溫度敏感基因形成的高轉(zhuǎn)衍生株。293T細(xì)胞進(jìn)行克隆,檢測(cè)pBNDpZAP載體,得到一株能生成高滴度感染逆轉(zhuǎn)錄病毒的衍生株293T/17細(xì)胞。293T/17細(xì)胞持續(xù)表達(dá)猿病毒40(SV40)T抗原,而因其高轉(zhuǎn)染能力篩選到17號(hào)克隆。293T/17細(xì)胞用pCRIPenv-pCRIPgag-2載體轉(zhuǎn)染得到ANJOU65細(xì)胞株,ANJOU65細(xì)胞再用pCRIPgag-2pGPT2E載體轉(zhuǎn)染得到親宅性外殼表達(dá)細(xì)胞株BOSC 23。ANJOU65細(xì)胞用攜帶gpt抗性基因的pCRIPAMgag載體轉(zhuǎn)染得到Bing雙向性表達(dá)包裝細(xì)胞株。

生物安全等級(jí)2

生長(zhǎng)培養(yǎng)基DMEM10% FBS1% P/S

推薦傳代比例1:3-1:4

推薦換液頻率2~3/

凍存條件

凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度:液氮

培養(yǎng)條件

氣相:空氣,95%;CO25%

溫度:37℃

注意事項(xiàng)該細(xì)胞貼壁松散,操作時(shí)請(qǐng)盡量輕柔;換液時(shí)需預(yù)熱培養(yǎng)基;收貨如有大塊脫落的細(xì)胞團(tuán),為正常現(xiàn)象,請(qǐng)按照收貨注意事項(xiàng)處理。

 

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:

1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;

2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;

3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;

4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;

5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

 ADAP2 基因全長(zhǎng)ORF克隆

 B3GALT4 基因全長(zhǎng)ORF克隆

 PEX14 基因全長(zhǎng)ORF克隆

 AGPAT3 基因全長(zhǎng)ORF克隆

 FBLIM1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

 HSD3B2 基因全長(zhǎng)ORF克隆

 ACOT7 基因全長(zhǎng)ORF克隆

 OPRL1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

 DRG1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

 ACTL8 基因全長(zhǎng)ORF克隆

293T/17 (胚腎細(xì)胞) 100mL Tricine Buffer,0.5M pH6.5  Tricine Buffer,0.5M pH6.5  常溫保存

30µL HRP標(biāo)記內(nèi)參抗體(GAPDH)  

250mL Sodium Borate Buffer(硼酸鈉緩沖液),0.5M,pH8.0   Sodium Borate Buffer,0.5M,pH8.0   常溫保存

100g RNPVP K30 (聚乙烯咯烷酮K30)   常溫

2 ug pEBFP-N1 pEBFP-N1 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

CDC厭氧菌瓊脂 CDC Anaerobic Agar 250g

25g 葡聚糖凝膠 LH-20 Sephadex LH-20  室溫保存

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