化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 小鼠胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1387 |
商品介紹：
名稱 小鼠胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞 2.組織來(lái)源：胎盤組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介： 小鼠胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞分離自胎盤組織；胎盤（placenta）是哺乳動(dòng)物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內(nèi)膜聯(lián)合長(zhǎng)成的母子間交換物質(zhì)的過渡性器官，由羊膜、葉狀絨毛膜和底蛻膜構(gòu)成。胎兒在子宮中發(fā)育，依靠胎盤從母體取得營(yíng)養(yǎng)，而雙方保持相當(dāng)?shù)莫?dú)立性。胎盤還產(chǎn)生多種維持妊娠的激素，是一個(gè)重要的內(nèi)分泌器官。有些爬行類和魚類也以胎生方式繁殖后代，胚胎生長(zhǎng)出一些輔助結(jié)構(gòu)如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結(jié)合，以達(dá)到母子間物質(zhì)的交換，這樣的結(jié)構(gòu)稱假胎盤。胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cell，MSC）是一種多能干細(xì)胞，是具有自我復(fù)制能力的多潛能細(xì)胞。在一定條件下，它可以分化成多種功能細(xì)胞像APSC多能細(xì)胞。在胚胎發(fā)育中來(lái)源于中胚層。在機(jī)體正常的組織損傷修復(fù)過程中，MSC是一種重要的參與組織再生的細(xì)胞庫(kù)。在組織損傷引起的特殊信號(hào)作用下，MSC遷移到受損部位，在局部聚集增殖，依據(jù)不同的損傷信號(hào)沿著不同途徑分化。MSC易于分離擴(kuò)增，體外倍增能力旺盛，能保持其多向分化能力。因此，MSC是一種實(shí)用的組織修復(fù)種子細(xì)胞。相較于其他干細(xì)胞，胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞具有來(lái)源方便，細(xì)胞數(shù)量充足，易于分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增和純化，傳代擴(kuò)增多代后仍具有干細(xì)胞特性。胎盤是干細(xì)胞的最佳來(lái)源。 5.方法簡(jiǎn)介： 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè)： 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)CD29、CD44免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-M303 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
大鼠 CXCL16 / SR-PSOX 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 Contactin 3 / CNTN3 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 Cathepsin S / CTSS 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 Neuroligin 1 / NLGN1 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
甲型流感 H12N1 (A/mallard duck/Alberta/342/1983) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
LRP10 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
食蟹猴 CD3d / CD3 delta 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
食蟹猴 Ephrin-A5 / EFNA5 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
大鼠 ESAM / Endothelial Cell Adhesion Molecule 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
大鼠 CADM3 / NECL1 / IGSF4B 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞化CREB轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC2抗體Anti-IFNAR1 AntibodyFaDu（人咽鱗癌）品牌
相關(guān)蛋白2抗體Anti-IFITM1 AntibodyHep G2（人肝癌）品牌
TWIST蛋白抗體Anti-IFNAR2 AntibodyKG-1（人急性骨髓性白血病）圖片
化羥化抗體Anti-IFNG AntibodyL6（大鼠成?。┱f(shuō)明書
拓普西異構(gòu)Ⅰ抗體Anti-IFNG AntibodyP3X63Ag8（小鼠骨髓瘤）品牌
腎小管間質(zhì)腎炎抗原抗體Anti-IFNG AntibodyI型膠原（含100mL解緩沖液）品牌
跨膜蛋白176A抗體Anti-IFNG Antibody3T3-L1（小鼠胚胎成纖維）圖片
跨膜蛋白176A抗體Anti-IFNG Antibody木瓜蛋白（含10mL解緩沖液）圖片
化工儀器網(wǎng)