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詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| RWPE-1 (正常前列腺上皮細(xì)胞) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0199 |
商品介紹：
名稱(chēng) RWPE-1 (正常前列腺上皮細(xì)胞) 別稱(chēng)RWPE1 年齡（性別）男；54歲 組織來(lái)源器官：前列腺； 疾?。赫?； 細(xì)胞類(lèi)型：上皮細(xì)胞 生長(zhǎng)特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 背景描述一位正常男性前列腺組織切片的周?chē)鷧^(qū)域的上皮細(xì)胞用單拷貝的人乳頭瘤病毒的18(HPV-18)進(jìn)行轉(zhuǎn)化，建立了RWPE-1細(xì)胞株[PubMed:9214605]。在三維Matrigel培養(yǎng)時(shí)，在雄激素作用下，RWPE-1細(xì)胞形成腺胞并向培養(yǎng)基中分泌PSA[PubMed:11170142]。當(dāng)與Matrigel或基質(zhì)細(xì)胞混合注射雄性裸鼠時(shí)，RWPE-1細(xì)胞也能形成腺胞[PubMed:11304724]并產(chǎn)生PSA。來(lái)源于RWPE-1細(xì)胞再用Kirstin鼠類(lèi)腫瘤病毒轉(zhuǎn)染Ki-ras基因，建立了能成瘤的RWPE-2細(xì)胞株[PubMed:9214605]和RWPE2-W99細(xì)胞株。另外，用N-甲醇-N-(MNU)處理RWPE-1細(xì)胞，建立了一系列模擬前列腺癌進(jìn)程中不同時(shí)期的成瘤細(xì)胞株。它們是WPE1-NA22、WPE1-NB14、WPE1-NB11和WPE1-NB26細(xì)胞株。據(jù)提供者報(bào)道，RWPE-1細(xì)胞經(jīng)過(guò)檢測(cè)，乙肝、丙肝、人免疫缺陷病毒都呈陰性。 生物安全等級(jí)2 生長(zhǎng)培養(yǎng)基K-SFM＋0.05mg/mL BPE＋5ng/mL EGF＋1% P/S 推薦傳代比例1:2-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時(shí)間~22 hours 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 致瘤性No, in nude mice (with or without Matrigel). No, in soft agar. 受體表達(dá)情況androgen receptor, expressed (upregulated upon exposure to androgen) 抗原表達(dá)情況kallikrein 3, KLK3 (prostate specific antigen, PSA); Homo sapiens, expressed (upon exposure to androgen); (upon exposure to androgen) 基因表達(dá)情況cytokeratin 18, cytokeratin 8; Tumor Supressor Gene(s): p53+, pRB+ |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
大鼠脂蛋白磷脂A2(Lp-PLA2)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
兔子脂多糖/內(nèi)毒素(LPS)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
小鼠白介素27(IL-27)免疫試劑盒*直銷(xiāo)
魚(yú)溶菌(腎淀粉樣變)(LZM)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
牛溶菌(LZM)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
犬孕激素/孕酮(PROG)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
精2(ARG2)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
大鼠蔗糖異麥芽糖(SI)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
心肌肌鈣蛋白T(cTn-T)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
周期素依賴(lài)性激5(CDK5)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
RWPE-1 (正常前列腺上皮細(xì)胞)1瓶 C918細(xì)胞株 C918 低溫運(yùn)輸和保存
大腸桿菌／大腸菌群顯色培養(yǎng)基(平皿) 9CM平皿
100U Vent DNA 聚合 Vent (exo-)DNA Polymerase -20℃保存
500mL Phosphate Buffer，0.2M, pH7.0 Phosphate Buffer，0.2M, pH7.0 常溫保存
0.1mL×10 Origami (DE3)感受態(tài)細(xì)胞 Origami (DE3) Competent Cell -80℃保存
2 ug pOTB7 STX1A pOTB7 STX1A 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
B5培養(yǎng)基（不含瓊脂） B5 Medium 250g
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