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小鼠骨髓細(xì)胞染色體標(biāo)本制備實(shí)驗(yàn)步驟
閱讀：1242 發(fā)布時(shí)間：2017-4-18| 提 供 商 | 上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 15KB |
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預(yù)處理→取股骨→沖洗骨髓→離心→低滲→離心→固定→離心→滴片→染色→觀察
1．預(yù)處理：實(shí)驗(yàn)前2.5-3小時(shí)，按每克體重注射0.02ml，給小白鼠腹腔注射秋水仙素。
2．取股骨：斷頸處死小鼠后，剔去肌肉組織，洗凈
3．沖洗骨髓：剪去兩端的股骨頭，吸取 10ml 2%檸檬酸鈉，注射 器針頭插入股骨一端,反復(fù)沖洗兩根股骨，洗液收集到10ml的離心管中
4 ．離心： 1000r/min 離心10 min ,棄上清
5 ．低滲：加入8ml 0.075mol/LKCl溶液,滴管吹散,37℃水浴低滲30 min ，中間（約15 min ）再吹散一次，使細(xì)胞分散，懸浮于溶液中
6．離心：1000r/min離心10 min，棄上清
7．固定：沉淀加8ml固定液，并用吸管輕 輕吹勻，進(jìn)行固定，中間（約15 min ）再吹散一次
8. 離心： 1000r/min 離心10 min ,留1 ml 左右上清，輕輕吹打成細(xì)胞懸液
9. 滴片：用吸管吸取細(xì)胞懸液，高度30-40 cm，滴在預(yù)冷的載玻片上，在酒精燈火焰上微微加熱，室溫晾干
10. 染色：改良石炭酸品紅染色10-20 min
11. 觀察：低倍———高倍