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體外培養(yǎng)細(xì)胞的營養(yǎng)和環(huán)境
閱讀：1133 發(fā)布時間：2017-6-15| 提 供 商 | 上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 17.8KB |
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體外培養(yǎng)細(xì)胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)與體內(nèi)相同，主要有糖、氨基酸和維生素三大類。目前市面上銷售的合成培養(yǎng)基如1640、199等所含的氨基酸已足夠，但在使用合成培養(yǎng)基時，仍需加入一些天然成份，如人或動物的血清、血漿和胎汁等。目前主要使用血清，以牛血清為主。血清的生物效應(yīng)早已證明，它含有多種促細(xì)胞生長因子、促貼附因子及其它活性物質(zhì)等。不僅能促進(jìn)細(xì)胞增長且能幫助細(xì)胞貼壁。不同血清對細(xì)胞作用不同。以小牛血清，成年牛和馬血清次之。合成培養(yǎng)基中不加血清也能維持細(xì)胞生存，但不能很好生長，加入5%的血清，對大多數(shù)細(xì)胞來說，能維持細(xì)胞不死和緩慢生長，要使細(xì)胞正常生長，一般需加10～15%的小牛血清。每個批號血清使用前要加熱處理，一般滅活于56℃水浴中30分鐘，每個批號血清使用前要加熱處理，一般滅活于56℃水浴中30分鐘，每5分鐘搖一次。10%血清營養(yǎng)液能促進(jìn)細(xì)胞增殖稱為生長液，2～5%血清培養(yǎng)液不能使細(xì)胞增殖而只能維持其生存稱為維持液。添加血清，雖利于細(xì)胞生長，但增加了不明成分，給分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果帶來了困難。因此，人們正在探索不用血清的無血清液并已取得了一定進(jìn)展。
環(huán)境
1．無菌：無菌是保證培養(yǎng)細(xì)胞生存的首要條件。培養(yǎng)液不僅對細(xì)胞是高營養(yǎng)物，對細(xì)菌和霉菌也是高度營養(yǎng)物，細(xì)胞培養(yǎng)中如污染微生物，其繁殖比細(xì)胞快且能產(chǎn)生毒素使細(xì)胞死亡，因此細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的關(guān)鍵之一是防止污染。污染微生物可來源于組織培養(yǎng)液、器皿、組織本身、工作者本身。因此，培養(yǎng)室的空氣等要*消毒，所有操作均要嚴(yán)格實(shí)行無菌操作，各種物品拿入操作臺前應(yīng)消毒，用灑精擦表面，用前于紫外線照；操作者洗手、泡手，酒精擦手，打開培養(yǎng)管前須在火焰上烙燒一下瓶口以使灰塵固定，操作時須將瓶、管斜放，吸管注入液體應(yīng)避免和瓶口接觸，操作時禁止講話。
2.溫度：組織培養(yǎng)的zui適溫度為35-37℃，偏離這一溫度范圍，細(xì)胞的正常代謝和生長將會受到影響，甚至導(dǎo)致死亡。培養(yǎng)細(xì)胞對低溫的耐受力比高溫強(qiáng)。溫度增加2-3℃對細(xì)胞產(chǎn)生不良影響，使之在24小時死亡，溫度在43℃以上，細(xì)胞大多被殺滅，而低溫對細(xì)胞影響較小，細(xì)胞置于25-35℃時，細(xì)胞仍能生存和生長，但速度緩慢，放在4℃數(shù)小時之后，再置37℃培養(yǎng)，細(xì)胞仍能繼續(xù)生長。
3.氣體：氣體也是細(xì)胞生存的必需條件之一。所需的氣體主要有O2和CO2。O2參與三羧酸循環(huán)產(chǎn)生能量供給細(xì)胞生長、增殖和合成各種成分。CO2既是細(xì)胞代謝產(chǎn)物也是細(xì)胞所需成分。它主要與維持培養(yǎng)液pH值有直接關(guān)系。
4.pH值：多數(shù)細(xì)胞的適宜pH值為7.0-7.4，偏離此范圍對細(xì)胞可產(chǎn)生有害的影響。各種細(xì)胞對pH值的要求也不*相同，但總的來說，細(xì)胞耐酸性比耐堿性大一些。培養(yǎng)液中的緩沖體系主要是碳酸氫鹽/ CO2。細(xì)胞代謝產(chǎn)生的各種酸使pH下降，而培養(yǎng)液中的NaHCO3產(chǎn)生CO2排入空間又使pH增加。
5.培養(yǎng)器皿的處理：培養(yǎng)器皿處理的好壞與否對于細(xì)胞的貼壁生長影響很大，除少數(shù)懸浮生長的細(xì)胞外，絕大多數(shù)細(xì)胞屬于貼壁依賴性細(xì)胞或培養(yǎng)物。它們只有貼附于不起化學(xué)作用的物體的表面時，才能生長、生存或維持功能。目前，常用的器皿主要有玻璃及塑料二大類。玻璃器皿一般須用清潔液浸泡1至7天，清水沖洗20次后再用蒸餾水過洗2次，烤干備用。用前160℃高溫消毒2小時后使用。96孔或24孔塑料板一般用2%NaOH浸泡4小時后，清水洗凈再用1N HCL浸泡4小時，用清水沖洗后再用蒸餾水漂洗，37℃干燥后，紫外線燈照射消毒；新橡皮塞須先用1/2NnaOH煮沸15分鐘，沖洗后再用4%HCL煮沸15分鐘，清水沖洗后用蒸餾水洗5次，煮沸10分鐘滅菌，或送高壓滅菌。
總之，細(xì)胞在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件下可迅速增殖，但若遇到不良環(huán)境細(xì)胞會變圓，停止生長，甚至死亡，這是細(xì)胞的保護(hù)機(jī)制。綜上所述，細(xì)胞培養(yǎng)的基本條件主要包括了營養(yǎng)液、無菌條件、PH、溫度、氣體條件和培養(yǎng)器皿的清潔度。