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轉(zhuǎn)化細(xì)胞篩選標(biāo)志的確定
閱讀：487 發(fā)布時(shí)間：2018-1-2這轉(zhuǎn)化細(xì)胞分離試劑盒如何取舍，主要取決于目標(biāo)細(xì)胞的表面是否具有特異性強(qiáng)的篩選標(biāo)志。這樣的篩選標(biāo)志能夠?qū)崿F(xiàn)特異性的捕獲，避免所獲得的細(xì)胞被非目標(biāo)細(xì)胞污染。如果你的目標(biāo)細(xì)胞剛好具有這樣的篩選標(biāo)志，那么正向選擇的細(xì)胞分離試劑盒就是*選擇。但如果目標(biāo)細(xì)胞并不具有特異性強(qiáng)的篩選標(biāo)志，那我們還是選用負(fù)向選擇的細(xì)胞分離試劑盒。
篩選標(biāo)志的確定
通過(guò)PubMed等數(shù)據(jù)庫(kù)中的文獻(xiàn)，我們一般可以確定在目標(biāo)細(xì)胞上表達(dá)的篩選標(biāo)志。如果文獻(xiàn)中找不到適合自己的表面標(biāo)志，我們還可以用目標(biāo)細(xì)胞的DNA序列進(jìn)行BLAST搜索。BLAST搜索結(jié)果會(huì)顯示，目標(biāo)細(xì)胞上可能表達(dá)的表面標(biāo)志，在此基礎(chǔ)上可以選取用于捕獲的細(xì)胞表面蛋白。舉例來(lái)說(shuō)，對(duì)一個(gè)T細(xì)胞進(jìn)行BLAST搜索，結(jié)果會(huì)顯示該細(xì)胞是否表達(dá)CD4或CD8。在得知目標(biāo)細(xì)胞表達(dá)CD4之后，我們可以先對(duì)樣品進(jìn)行一個(gè)免疫實(shí)驗(yàn)（如ELISA），以檢驗(yàn)BLAST搜索的結(jié)果。一旦證實(shí)目標(biāo)細(xì)胞的確表達(dá)CD4，我們就可以用相應(yīng)試劑盒來(lái)篩選CD4陽(yáng)性的T細(xì)胞。
一般流程
對(duì)于一個(gè)旨在分離CD4陽(yáng)性T細(xì)胞的試劑盒來(lái)說(shuō)，操作流程主要有以下幾步。首先，將樣品與anti-CD4抗體包被的磁珠共同孵育，使抗體與CD4+ T細(xì)胞結(jié)合。然后洗去不需要的非目標(biāo)細(xì)胞（即不表達(dá)CD4的細(xì)胞），留下磁珠-抗體-細(xì)胞復(fù)合物。轉(zhuǎn)化細(xì)胞將上述復(fù)合物與能結(jié)合anti-CD4抗體的二抗一起孵育，二抗就會(huì)替代CD4+T細(xì)胞，形成磁珠-抗體-二抗復(fù)合物。我們可以用磁鐵去除這種磁珠-抗體-二抗復(fù)合物，而所有的CD4+細(xì)胞留在上清中。zui后，只需將上清轉(zhuǎn)移就可以進(jìn)行下游研究了。
50mg 特非那定相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 Terfenadine Related Compound B
10161-33-8 50mg 孕三烯酮標(biāo)準(zhǔn)品 Trenbolone CIII
521-78-8 50mg 馬來(lái)酸曲米帕明標(biāo)準(zhǔn)品 Trimipramine Maleate
3083-77-0 50mg 阿糖尿苷標(biāo)準(zhǔn)品 Uracil Arabinoside
50700-72-6 50mg 維庫(kù)溴銨標(biāo)準(zhǔn)品 Vecuronium Bromide
190850-50-1 50mg 維拉帕米相關(guān)物質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品 Verapamil Related Compound D
120-14-9 50mg 維拉帕米相關(guān)物質(zhì)E標(biāo)準(zhǔn)品 Verapamil Related Compound E
50mg 維替泊芬相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 Verteporfin Related Compound A
7481-88-1 50mg 扎西他濱相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 Zalcitabine Related Compound A
轉(zhuǎn)化細(xì)胞