化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
使用方法：
測定法的靈敏度來自作為報告的酶。*，酶是一種有機催化劑，很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng)，產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。 24μg/ml 5號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12μg/ml 4號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6μg/ml 3號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3μg/ml 2號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5μg/ml 1號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。|
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
ELISA Kit檢測試劑盒優(yōu)點多，更加方便我們的科研學(xué)者進行科學(xué)實驗，是科研實驗的好伙伴。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
PDI ELISA Kit | GOY-E98797 |
實驗流程:
1. 實驗前標(biāo)準(zhǔn)品、試劑及樣本的準(zhǔn)備；
2. 加樣（標(biāo)準(zhǔn)品及樣本）100µL，37°C孵育1小時；
3. 吸棄，加檢測溶液A100µL，37°C孵育1小時；
4. 洗板3次；
5. 加檢測溶液B100µL，37°C孵育30分鐘；
6. 洗板5次；
7. 加TMB底物90µL，37°C孵育10-20分鐘；
8. 加終止液50µL，立即450nm讀數(shù)。
?
樣本實驗前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
注意事項：
1.加樣：
①實驗樣本過多時，可分批次操作，以減少實驗時間延長造成的誤差；
②加酶試劑后，用吸水紙吸干孔外試劑；
③作定量試驗時，使用加樣器加注試劑，并經(jīng)常校正其準(zhǔn)確性，此外，要做到一份樣本一個移液頭，防止交叉污染。
2.溫育：
①如有兩種溫度，盡量使用較低的溫育溫度、較長反應(yīng)時間的條件；
②用1個小溫度計放置在板孔反應(yīng)液中測量觀察；
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度會造成“邊緣效應(yīng)”，因此盡量采用水?。?/span>
3.洗板：
①手工洗板時，拍板時要垂直，避免交叉污染，用力不能過猛，防止抗原抗體復(fù)合物脫離；
②洗板機洗板時應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢，若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出；
③為了洗滌效果好，實驗室可采用機器與人工洗滌相結(jié)合的方法，在機器洗滌后再進行人工洗板1-2次，或適當(dāng)增加洗板的次數(shù)；
4.顯色：
ELISA試劑盒中，如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物，則提供的底物為A和B兩瓶應(yīng)用液；如以鄰苯二胺(OPD)為底物，則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑，要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光，但A、B液應(yīng)盡量避免接觸金屬器械。
5.判定：
讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成，定性測定用肉眼判讀試驗結(jié)果時，反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10-15 cm；定量測定時用酶標(biāo)儀讀取結(jié)果，酶標(biāo)儀不應(yīng)置于陽光或強光照射下，需先預(yù)熱15-30 min再進行測試。
人蛋白酪氨酸磷酸酶受體K(PTPRK)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human PTPRK (Protein Tyrosine Phosphatase Receptor Type K) ELISA Kit
人L選擇素(SELL)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human SELL (L-Selectin) ELISA Kit
人MAX二聚化蛋白1(mxd1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human MXD1 (MAX Dimerization Protein 1) ELISA Kit
人N-乙酰β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human NAGase (N-Acetyl Beta-D-Glucosaminidase) ELISA Kit
人血紅蛋白μ (HBμ)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human HBμ (Hemoglobin, Mu) ELISA Kit
人神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白2(NRG-2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human NRG-2 (Neuregulin 2) ELISA Kit
人神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白3(NRG-3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human NRG-3 (Neuregulin 3) ELISA Kit
人NOD樣受體(NLR)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human NLR (NOD-Like Receptor9) ELISA Kit
人氨基端前腦鈉素(NT-proBNP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human NT-ProBNP (N-Terminal Pro-Brain Natriuretic Peptide) ELISA Kit
人N端外顯肽(Ext-N)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human Ext-N (N-Terminal Extein) ELISA Kit
人N端中段骨鈣素(N-MID-OT)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human N-MID-OT (N-MID Osteocalcin) ELISA Kit
人蛋白酪氨酸磷酸酶受體N(PTPRN)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human PTPRN (Protein Tyrosine Phosphatase Receptor Type N) ELISA Kit
人Ras-GTP酶激活蛋白1(Ras-GAP1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human Ras-GAP1 (Rac-GTPase Activating Protein 1) ELISA Kit
人N-乙酰半乳糖胺-6-硫酸酯酶(GAS)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human GAS (N-Acetylgalactosamine 6-Sulfatase) ELISA Kit
PDI蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶ELISA Kit菖蒲 CAS 21698-44-2 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
阿馬堿 CAS 483-04-5 規(guī)格： HPLC≥98%;100mg 訂購|咨詢
白頭翁皂苷E-2 CAS 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢
水蘇堿 CAS 4136-37-2 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
白頭翁皂苷A CAS 129724-84-1 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
谷氨酸單鈉鹽 CAS CAS:6106-04-3 規(guī)格： HPLC≥98%;50mg 訂購|咨詢
異水飛薊賓 CAS 72581-71-6 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢
對羥基 CAS 123-08-0 規(guī)格： HPLC≥99%;100mg 訂購|咨詢
茄醇 CAS 13190-97-1 規(guī)格： HPLC≥97%;20mg 訂購|咨詢
1,8-桉葉素 CAS 規(guī)格： HPLC≥99%;0.5mL 訂購|咨詢
林澤蘭內(nèi)酯B CAS 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢
28-去甲基-β-香樹脂 CAS 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢
氫東莨菪堿 CAS 114-49-8 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
蒼術(shù)素 CAS 55290-63-6 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
化工儀器網(wǎng)