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詳細(xì)介紹
實(shí)驗(yàn)流程:
1. 實(shí)驗(yàn)前標(biāo)準(zhǔn)品、試劑及樣本的準(zhǔn)備；
2. 加樣（標(biāo)準(zhǔn)品及樣本）100µL，37°C孵育1小時(shí)；
3. 吸棄，加檢測溶液A100µL，37°C孵育1小時(shí)；
4. 洗板3次；
5. 加檢測溶液B100µL，37°C孵育30分鐘；
6. 洗板5次；
7. 加TMB底物90µL，37°C孵育10-20分鐘；
8. 加終止液50µL，立即450nm讀數(shù)。
ELISA Kit檢測試劑盒優(yōu)點(diǎn)多，更加方便我們的科研學(xué)者進(jìn)行科學(xué)實(shí)驗(yàn)，是科研實(shí)驗(yàn)的好伙伴。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
GHbA1c ELISA Kit | GOY-E98764 |
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樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
注意事項(xiàng)：
1.加樣：
①實(shí)驗(yàn)樣本過多時(shí)，可分批次操作，以減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間延長造成的誤差；
②加酶試劑后，用吸水紙吸干孔外試劑；
③作定量試驗(yàn)時(shí)，使用加樣器加注試劑，并經(jīng)常校正其準(zhǔn)確性，此外，要做到一份樣本一個(gè)移液頭，防止交叉污染。
2.溫育：
①如有兩種溫度，盡量使用較低的溫育溫度、較長反應(yīng)時(shí)間的條件；
②用1個(gè)小溫度計(jì)放置在板孔反應(yīng)液中測量觀察；
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度會(huì)造成“邊緣效應(yīng)”，因此盡量采用水浴；
3.洗板：
①手工洗板時(shí)，拍板時(shí)要垂直，避免交叉污染，用力不能過猛，防止抗原抗體復(fù)合物脫離；
②洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢，若被雜物堵塞時(shí)可用注射器針頭挑出；
③為了洗滌效果好，實(shí)驗(yàn)室可采用機(jī)器與人工洗滌相結(jié)合的方法，在機(jī)器洗滌后再進(jìn)行人工洗板1-2次，或適當(dāng)增加洗板的次數(shù)；
4.顯色：
ELISA試劑盒中，如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物，則提供的底物為A和B兩瓶應(yīng)用液；如以鄰苯二胺(OPD)為底物，則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑，要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光，但A、B液應(yīng)盡量避免接觸金屬器械。
5.判定：
讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成，定性測定用肉眼判讀試驗(yàn)結(jié)果時(shí)，反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10-15 cm；定量測定時(shí)用酶標(biāo)儀讀取結(jié)果，酶標(biāo)儀不應(yīng)置于陽光或強(qiáng)光照射下，需先預(yù)熱15-30 min再進(jìn)行測試。
人精氨酰tRNA合成酶(RARS)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human RARS (Arginyl tRNA Synthetase, cytoplasmic) ELISA Kit
人成纖維細(xì)胞生長因子受體3(FGFR3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human FGFR3 (Fibroblast Growth Factor Receptor 3) ELISA Kit
人成纖維細(xì)胞生長因子受體4(FGFR4)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human FGFR4 (Fibroblast Growth Factor Receptor 4) ELISA Kit
人細(xì)胞色素P450氧化還原酶(CPR)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human CPR (Cytochrome P450 Reductase) ELISA Kit
人二肽基肽酶X (DPP10)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human DPP10 (Dipeptidyl Peptidase X) ELISA Kit
人細(xì)胞因子受體樣因子1(CRLF1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human CRLF1 (Cytokine Receptor Like Factor 1) ELISA Kit
人集落刺激因子2受體β (CSF2Rβ)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human CSF2Rβ (Colony Stimulating Factor 2 Receptor Beta) ELISA Kit
人碳酸酐酶III(CA3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human CA3 (Carbonic Anhydrase III, Muscle Specific) ELISA Kit
人抗胰島素受體抗體(AIRA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human AIRA (Anti-Insulin Receptor Antibody) ELISA Kit
人細(xì)胞色素P450家族成員1A1(CYP1A1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human CYP1A1 (Cytochrome P450, family 1, subfamily A, polypeptide 1) ELISA Kit
人細(xì)胞色素P450家族成員1A2(CYP1A2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human CYP1A2 (Cytochrome P450, family 1, subfamily A, polypeptide 2) ELISA Kit
人抗角蛋白抗體(AKA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human AKA (Anti-Keratin Antibody) ELISA Kit
人雙腎上腺皮質(zhì)激素樣激酶1(DCLK1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human DCLK1 (Doublecortin Like Kinase 1) ELISA Kit
人二氫嘧啶脫氫酶(DPYD)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human DPYD (Dihydropyrimidine Dehydrogenase) ELISA Kit
GHbA1c糖化血紅蛋白A1cELISA Kit橙皮內(nèi)酯 CAS 23971-42-8 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
D-阿拉伯糖醇 CAS 488-81-3 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
麥冬甲基黃烷A; CAS 74805-92-8 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢
竹節(jié)參皂苷ⅣA CAS 51415-02-2 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
常春藤苷D CAS 760961-03-3 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
去氧膽酸鈉 CAS 302-95-4 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
水飛薊汀 CAS 33889-69-9 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
茶黃素-3-沒食子酸酯 CAS 30462-34-1 規(guī)格： HPLC≥93%;20mg 訂購|咨詢
10-羥基癸烯酸 CAS 1679-53-4 規(guī)格： HPLC≥96%;20mg 訂購|咨詢
羅漢果皂苷ⅡA2 CAS 88901-45-5 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢
15-羥基松香酸 CAS 規(guī)格： HPLC≥98%;5mg 訂購|咨詢
野馬追內(nèi)酯B CAS 877822-40-7 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
歐當(dāng)歸內(nèi)酯A CAS 591-12-8 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
知母皂苷E CAS 136565-73-6 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢
使用方法：
測定法的靈敏度來自作為報(bào)告的酶。*，酶是一種有機(jī)催化劑，很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng)，產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。 24μg/ml 5號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12μg/ml 4號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6μg/ml 3號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3μg/ml 2號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5μg/ml 1號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。|
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
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