RANKL核因子κB受體活化因子配基ELISA Kit不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

ELISA Kit檢測(cè)試劑盒優(yōu)點(diǎn)多，更加方便我們的科研學(xué)者進(jìn)行科學(xué)實(shí)驗(yàn)，是科研實(shí)驗(yàn)的好伙伴。

產(chǎn)品名稱	英文名稱	貨號(hào)
RANKL核因子κB受體活化因子配基ELISA Kit	RANKL ELISA Kit	GOY-E98768

實(shí)驗(yàn)流程:
1. 實(shí)驗(yàn)前標(biāo)準(zhǔn)品、試劑及樣本的準(zhǔn)備；
2. 加樣（標(biāo)準(zhǔn)品及樣本）100µL，37°C孵育1小時(shí)；
3. 吸棄，加檢測(cè)溶液A100µL，37°C孵育1小時(shí)；
4. 洗板3次；
5. 加檢測(cè)溶液B100µL，37°C孵育30分鐘；
6. 洗板5次；
7. 加TMB底物90µL，37°C孵育10-20分鐘；
8. 加終止液50µL，立即450nm讀數(shù)。
?
樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
注意事項(xiàng)：
1.加樣：
①實(shí)驗(yàn)樣本過(guò)多時(shí)，可分批次操作，以減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間延長(zhǎng)造成的誤差；
②加酶試劑后，用吸水紙吸干孔外試劑；
③作定量試驗(yàn)時(shí)，使用加樣器加注試劑，并經(jīng)常校正其準(zhǔn)確性，此外，要做到一份樣本一個(gè)移液頭，防止交叉污染。
2.溫育：
①如有兩種溫度，盡量使用較低的溫育溫度、較長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間的條件；
②用1個(gè)小溫度計(jì)放置在板孔反應(yīng)液中測(cè)量觀察；
③96孔板周?chē)着c中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度會(huì)造成“邊緣效應(yīng)”，因此盡量采用水?。?/span>
3.洗板：
①手工洗板時(shí)，拍板時(shí)要垂直，避免交叉污染，用力不能過(guò)猛，防止抗原抗體復(fù)合物脫離；
②洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢，若被雜物堵塞時(shí)可用注射器針頭挑出；
③為了洗滌效果好，實(shí)驗(yàn)室可采用機(jī)器與人工洗滌相結(jié)合的方法，在機(jī)器洗滌后再進(jìn)行人工洗板1-2次，或適當(dāng)增加洗板的次數(shù)；
4.顯色：
ELISA試劑盒中，如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物，則提供的底物為A和B兩瓶應(yīng)用液；如以鄰苯二胺(OPD)為底物，則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑，要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光，但A、B液應(yīng)盡量避免接觸金屬器械。
5.判定：
讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成，定性測(cè)定用肉眼判讀試驗(yàn)結(jié)果時(shí)，反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10-15 cm；定量測(cè)定時(shí)用酶標(biāo)儀讀取結(jié)果，酶標(biāo)儀不應(yīng)置于陽(yáng)光或強(qiáng)光照射下，需先預(yù)熱15-30 min再進(jìn)行測(cè)試。

人血紅蛋白(HB)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human HB (Hemoglobin) ELISA Kit

人全細(xì)胞色素C合酶(HCCS)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒  Human HCCS (Holocytochrome C Synthase) ELISA Kit

人鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶IIα(CAMK2α)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human CAMK2α (Calcium/Calmodulin-Dependent Protein Kinase II Alpha) ELISA Kit

人芳基硫酸酯酶B(ARSB)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒   Human ARSB (Arylsulfatase B) ELISA Kit

人Bcl2關(guān)聯(lián)永生基因3(BAG3)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human BAG3 (Bcl2 Associated Athanogene 3) ELISA Kit

人組氨酸豐富糖蛋白(HRG)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒  Human HRG (Histidine Rich Glycoprotein) ELISA Kit

人硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPG)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human HSPG (Heparan Sulfate Proteoglycan) ELISA Kit

人膜聯(lián)蛋白A5(ANXA5 )酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒   Human ANXA5 (Annexin A5) ELISA Kit

人HtrA絲氨酸肽酶1(HTRA1)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human HTRA1 (HtrA Serine Peptidase 1) ELISA Kit

人白介素10受體β(IL10Rβ)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human IL10Rβ (Interleukin 10 Receptor Beta) ELISA Kit

人胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體(IGF1R)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human IGF1R (Insulin Like Growth Factor 1 Receptor) ELISA Kit

人低氧上調(diào)節(jié)因子1(HYOU1)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒  Human HYOU1 (Hypoxia Up Regulated 1) ELISA Kit

人胰島素自身抗體(IAA)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human IAA (Insulin Autoantibody) ELISA Kit

人細(xì)胞間粘附分子4(ICAM4)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human ICAM4 (Intercellular Adhesion Molecule 4) ELISA Kit

RANKL核因子κB受體活化因子配基ELISA Kit蘆薈甙 CAS 1415-73-2 規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial 訂購(gòu)|咨詢

基紅花黃色素A CAS 78281-02-4 規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial 訂購(gòu)|咨詢

刺棒棕(BACTRIS GASIPAES CAS 10309-37-2 規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial 訂購(gòu)|咨詢

木蘭花堿(化物) CAS 6681-18-1 規(guī)格： HPLC≥98%；20mg/vial 訂購(gòu)|咨詢

香 CAS 91-64-5 規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial 訂購(gòu)|咨詢

特 CAS 75-98-9 規(guī)格： 100ML 25ML 500ML;99% 訂購(gòu)|咨詢

纖細(xì)薯蕷皂苷 CAS 19083-00-2 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

梣 CAS 28808-62-0 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

去氫木香內(nèi)酯 CAS 477-43-0 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

知母皂苷A1(94%) CAS  規(guī)格： 10mg 訂購(gòu)|咨詢

大蒜素（UV98%) CAS 539-86-6 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

去氫駱駝蓬堿 CAS 442-51-3 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

白蘞對(duì)照藥材 CAS  規(guī)格： 1g 訂購(gòu)|咨詢

奎寧 CAS 130-95-0 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

使用方法：
測(cè)定法的靈敏度來(lái)自作為報(bào)告的酶。*，酶是一種有機(jī)催化劑，很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng)，產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。   24μg/ml    5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 12μg/ml    4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 6μg/ml     3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 3μg/ml     2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 1.5μg/ml   1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。|
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。