內(nèi)質(zhì)網(wǎng)紅色熒光探針(ER-Tracker Red)公司正在出售的產(chǎn)品：RANK 核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB受體抗體2,2'-聯(lián)吡啶-4,4'-二 96%
OPGL/ODF 骨保護(hù)蛋白配體抗體(破骨分化因子)N-苯酰-L-精氨酯鹽鹽 98%
OPN 骨橋蛋白抗體(分泌型蛋白1)人2-溴芴 97%
OPN 骨橋蛋白抗體(分泌型蛋白1)2,2'-聯(lián)喹啉-4,4'-二二鈉 98%
Orexin-A 增

產(chǎn)品屬性：

中文名稱：細(xì)胞凋亡染色試劑盒(細(xì)胞Hoechst染色)

英文名稱：Hoechst Staining Kit

產(chǎn)品規(guī)格：100次

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

商品介紹：

公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。

2) 對于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測

1) 流式細(xì)胞儀檢測：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測（1小時內(nèi)檢測）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
3β-乙酰氧基-7,25-甘遂二烯-24(R)-（標(biāo)...英文名稱： Chitin磷化Ephrin B抗體包裝5g

4'-去鬼臼英文名稱： Coenzyme A, free acid, hydrate (COA)磷化Ephrin B抗體包裝5mg

4'-去氧基表鬼臼（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Paclobutrazol磷化雌激受體α抗體包裝5g

4-β-D-葡萄糖基-1,3,7-三羥基呫噸英文名稱： Hydrazine sulfate磷化雌激受體α抗體包裝25g

4-基傘形-β-D-木糖苷英文名稱： Polyphenol Oxidase from Mushrooms表皮生長因子受體底物8抗體包裝1g

4-羥基喹唑啉英文名稱： Copper(II) sulfate, pentahydrate內(nèi)皮1抗體包裝1g

4-硝基兒茶酚(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： N-Acetyl-D-glucosamine腸道病71型/手足口病病抗體包裝5g

4’-O-基補(bǔ)骨脂查爾B英文名稱： Manganous sulfate monohydrate絲裂原活化蛋白激1抗體包裝25g

4β-羥基黃芪紫檀烷苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Rubidium chloride絲裂原活化蛋白激3抗體包裝5g

5,7,4'-三羥基-8-基二氫黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Poly-L-lysine雌激受體α抗體包裝25g

5,7-二羥基色原英文名稱： Span* 80雌激受體β 抗體包裝5g

5-O-基維斯阿米-4'-O-β-D-呋喃芹糖基-...英文名稱： PEG 1000上皮特異性抗原抗體包裝100g

5-O-基維斯阿米苷（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Tryptone內(nèi)皮-1抗體包裝25g

5-羥基糠（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： DNSCl, Dansyl chloride天冬蛋白家族蛋白抗體包裝100g

5-羥色（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： N-Ethylmaleimide蝮蛇蛇蛋白抗體包裝25g

油污染土鞘菌Sphingobium│olei 質(zhì)量規(guī)格：>99%,USP32,A型羧化基質(zhì)谷蛋白試劑盒人參炔;Falcarinol，Pana

猴頭菇Hericium│erinaceus (Bull.) Pers. 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品羧化不全骨鈣試劑盒肉豆寇單甘油酯;Monomyristi

鮑曼/醋鈣復(fù)合不動桿菌Acinetobacter│baunannii/calcoaceticus complex 質(zhì)量規(guī)格：>99%,可用于培養(yǎng)髓樣分化因子88試劑盒肉豆蔻甘油三酯;Tritetradec
內(nèi)質(zhì)網(wǎng)紅色熒光探針(ER-Tracker Red)糙孢籃狀 反式-4-氨基環(huán)己抗磷脂酰乙IgM抗體Elisa

嗜中溫寒冷桿 1-氯壬烷基質(zhì)蛋白Del-1Elisa

硬毛栓孔 3,5-二氟-2,6-二胰島受體βElisa

釀酒酵母 1-苯?；?4-酮轉(zhuǎn)化生長因子激1Elisa

產(chǎn)氣列契瓦尼爾氏 (溴甲基)三氟酸鈉氯協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1Elisa

葡萄座腔 2-氨基-3-氟-5-氯吡啶轉(zhuǎn)錄因子SOX5Elisa

磚色棲砂桿 5(6)-羧基四甲基羅丹明琥珀酰亞酯肌酸激同工MMElisa

冷溫木拉克酵母 6-硝基-1-茚滿酮肌酸激同工BBElisa

奧氏蜜環(huán) 焦脫鎂葉綠酸-a抑制β-BElisa

菊異莖點(diǎn)霉 4-(2-氯苯氧基）糖蛋白49AElisa

白色金針菇 2-氨基-4-氯-5-硝基吡啶6-磷酸葡萄糖脫氫Elisa

雞傷寒沙門氏 4-氨基-3-氟吡啶乙酰羧化Elisa

深紅沙雷氏 7-甲基糖原合成激3αElisa

尖孢鐮孢 1，3-二溴-3-甲基丁烷磷酸化糖原合成激3αElisa

茶藨子葡萄座腔 雙油酸甘油酯酪氨酸蛋白激受體ErbB2Elisa

 

發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研

商品介紹：

細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個方面：

細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括：

①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；

②生物膜與細(xì)胞器的研究；

③細(xì)胞骨架體系的研究；

④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；

⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；

⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；

⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；

⑧細(xì)胞工程.

實(shí)驗(yàn)報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGF-β2)英文名稱：TGF-β2 ELISA Kit載脂蛋白E4抗體包裝25g

轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)英文名稱：TGFβ2 ELISA Kit自噬相關(guān)基因AMBRA1抗體包裝10mg

轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)英文名稱：TGF-β1 ELISA Kit磷化自噬相關(guān)蛋白4C抗體包裝50mg

轉(zhuǎn)化生長因子β(TGFβ1)英文名稱：TGFβ1 ELISA Kit磷化自噬相關(guān)蛋白4C抗體包裝25g

轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)英文名稱：TGF-α ELISA Kit磷化凋亡信號調(diào)節(jié)激1抗體包裝5g

轉(zhuǎn)化生長因子α(TGFα)英文名稱：TGFα ELISA Kit磷化失調(diào)癥蛋白1抗體包裝1g

主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ)英文名稱：MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ ELISA Kit脊髓小腦失調(diào)癥蛋白1抗體包裝5g

主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHC-Ⅱ/H-2Ⅱ)英文名稱：MHC-Ⅱ/H-2ⅡELISA Kit磷化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體包裝25g

主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(MHCⅠ/H-2Ⅰ)英文名稱：MHCⅠ/H-2Ⅰ ELISA Kit磷化凋亡信號調(diào)節(jié)激1抗體包裝5g

腫瘤特異生長因子/腫瘤相關(guān)因子(TSGF)英文名稱：TSGF ELISA Kit磷化凋亡信號調(diào)節(jié)激1抗體包裝1g

腫瘤特異生長因子/腫瘤相關(guān)因子(TGSF)英文名稱：TGSF ELISA Kit磷化活化復(fù)制因子2抗體包裝5g

腫瘤壞死因子樣細(xì)胞凋亡弱誘導(dǎo)因子(TWEAK)英文名稱：TWEAK ELISA Kit磷化鈉ATP蛋白a1抗體包裝100g

腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體受體4(TRAIL-R4)英文名稱：TRAIL-R4 ELISA Kit磷化鈉ATP蛋白a1抗體包裝25g

腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體受體3(TRAIL-R3)英文名稱：TRAIL-R3 ELISA Kit乙酰羧化抗體包裝100g

腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體1(TRAIL-R1)英文名稱：TRAIL-R1 ELISA Kit磷化乙酰羧化抗體包裝25g

磷化熱休克蛋白β5/αb晶體蛋白質(zhì)/α-晶體蛋白b鏈抗體Pim-2原癌基因(PIM2)R406 (free base) is a potent Syk inhibitor with IC50 of 41 nM in a cell-free ass
細(xì)胞凋亡染色試劑盒(細(xì)胞Hoechst染色)立枯絲核 五-O-乙?；?β-D-吡喃葡萄糖1,25二羥基D檢測試劑盒

盤長孢狀盤孢 卡比多巴1,25-二羥基D3檢測試劑盒

紅鬼筆 紫蘇1,3-二磷酸甘油酸檢測試劑盒

伯克霍爾德 鹽酸芬他林1,4,5-三磷酸肌檢測試劑盒

環(huán)圈鏈霉 乙酰甲喹1,5-脫水葡萄糖;1,5-脫水山梨檢測試劑盒

青霉 β-煙酰單核苷酸11去氫血栓烷B2檢測試劑盒

阿舒假囊酵母 氟化鍶11脫氫血栓素B2檢測試劑盒

曲霉屬 香葉木素1-3-β-D葡聚糖檢測試劑盒

解脂假絲酵母 DL-薄荷14-3-3蛋白eta檢測試劑盒

白布勒擔(dān)孢酵母 N-(2',6'-二甲苯基)-2-甲酰15脂加氧酶檢測試劑盒

白靈側(cè)耳 高良姜素17β-雌二檢測試劑盒

靈芝屬 聚氧烯甘油GP17-羥皮質(zhì)類固檢測試劑盒

黑木耳 單雙甘油脂肪酸脂17羥孕酮檢測試劑盒

美澳型核果褐腐病 7-異氧基異黃酮17-酮皮質(zhì)類固檢測試劑盒

玉米大斑病 槐定堿1α羥化酶檢測試劑盒

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)