操作流程
收集基因信息——>設(shè)計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測序——>測序結(jié)果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質(zhì)粒實物保存。

PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix （2mM）
4 μl     引物1（10pM）
2 μl     引物2（10pM）
2 μl     Taq酶 （2U/μl）
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl      加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
下列相關(guān)產(chǎn)品：
阿洛夫奧斯特線蟲PCR檢測試劑盒

阿馬帕里病毒PCR檢測試劑盒

阿尼昂尼昂病毒PCR檢測試劑盒

埃博拉病毒(EBOV)核酸檢測試劑盒
實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性定量方法，已得到，廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內(nèi)標和引物，內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合，再加入抗di高辛酶標抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。
下列是公司正在銷售的產(chǎn)品：
(+)-Noe's reagent  中文名：(+)-核歐沃豪斯效應試劑  分子式：C24H38O3  度：98.0%  小鼠抑制素A(mouse Inhibin A)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  

1,2-Bis(3-indenyl)ethane  中文名：1,2-雙(3-茚基)乙烷  分子式：C20H18  度：98.0%  小鼠白介素23(IL-23)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

N-[Bis(methylthio)methylene]- p-sulfonamide  中文名：N-[雙(甲硫基)亞]對甲苯磺酰胺  分子式：C10H13NO2S3  度：98.0%  小鼠白介素2(IL-2)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

4,4'-Bis(5-methyl-2-benzoxazolyl)stilbene  中文名：4,4'-雙(5--2-苯并惡唑基)芪  分子式：C30H22N2O2  度：98.0%  小鼠白介素1受體拮抗劑(IL-1Ra)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

N,N-Bis(2-chloroethyl)-p-sulphonamide  中文名：N,N-雙(2-氯乙基)對甲苯磺酰胺  分子式：C11H15Cl2NO2S  度：98.0%  小鼠白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

10326-41-7  D-(-)-Lactic acid  100mg  Semen oroxyli木蝴蝶PCR鑒定試劑盒 

10326-41-7  D-(-)-Lactic acid  500mg  Fructus chaenomelis木瓜PCR鑒定試劑盒 

1032-65-1  2-Deoxycytidine 5-monophosphate  1g  Fructus chaenomelis木瓜PCR鑒定試劑盒 

1032754-81-6  GNE-477  1mg  Cortex moutan牡丹皮PCR鑒定試劑盒 

1032754-81-6  GNE-477  5mg  Cortex moutan牡丹皮PCR鑒定試劑盒
傘枝梨頭霉PCR檢測試劑盒100900-26-3  H-Arg-Arg-βNA . 3 HCl  250mg  Fructus tsaoko草果探針法PCR鑒定試劑盒 

1009104-85-1  SMAD3 Inhibitor, SIS3  500μg  Semen alpiniae  katsumadai草豆蔻探針法PCR鑒定試劑盒 

1009104-85-1  SMAD3 Inhibitor, SIS3  1mg  Semen alpiniae  katsumadai草豆蔻探針法PCR鑒定試劑盒 

1009104-85-1  SMAD3 Inhibitor, SIS3  5mg  Rhizoma atractylodis蒼術(shù)探針法PCR鑒定試劑盒 

1009119-64-5  Daclatasvir  5mg  Rhizoma atractylodis蒼術(shù)探針法PCR鑒定試劑盒
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。