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寄禽腎炎病毒型PCR檢測(cè)試劑盒

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更新時(shí)間:2023-02-28 13:41:30瀏覽次數(shù):172

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T
應(yīng)用領(lǐng)域 化工 主要用途 僅供科研實(shí)驗(yàn)
英文名稱 Avian Nephritis Virus 2(ANV2)2RTPCR 規(guī)格 50T
禽腎炎病毒型PCR檢測(cè)試劑盒公司正在銷售的產(chǎn)品:巨球菌PCR檢測(cè)試劑盒
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詳細(xì)介紹

操作流程
收集基因信息——>設(shè)計(jì)引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細(xì)胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽(yáng)性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測(cè)序——>測(cè)序結(jié)果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫(kù)——>質(zhì)粒實(shí)物保存。

產(chǎn)品名稱

英文名稱

規(guī)格

禽腎炎病毒型PCR檢測(cè)試劑盒

Avian Nephritis Virus 2ANV22RTPCR

50T

4.png

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1
:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix
2mM
4 μl    
引物110pM
2 μl    
引物210pM
2 μl     Taq
酶 (2U/μl
1 μl     DNA
模板(50ng-1μg/μl
1 μl      
ddH2O 50 μl
PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2
:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93
預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93 40s → 58 30s → 72 60s,循環(huán)30-35次,在727min
3
:伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛?span>PCR
試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4待電泳檢測(cè)或-20長(zhǎng)期保存。
4
PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
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實(shí)時(shí)熒光定量PCR
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限,實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度,并記錄在電腦軟件之中,通過(guò)對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR無(wú)需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的:
1
Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí),剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期(對(duì)數(shù)期),此時(shí)微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性,即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增,得到的Ct值是恒定的。
2
Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測(cè)定,因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,重現(xiàn)性定量方法,已得到,廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測(cè)等諸多領(lǐng)域。
定量PCR方法:
a、競(jìng)爭(zhēng)法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競(jìng)爭(zhēng)性模板。在同一反應(yīng)管中,待測(cè)樣品與競(jìng)爭(zhēng)模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增(其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記)。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競(jìng)爭(zhēng)性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段,而待測(cè)模板不被酶切,可通過(guò)電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開(kāi),分別測(cè)定熒光強(qiáng)度,根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù)。
b
、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí),內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長(zhǎng)度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開(kāi)來(lái),分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度,以內(nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板。
c
PCRELISA
利用di高辛等標(biāo)記引物,擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗di高辛酶標(biāo)抗體-辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCRELISA法只是定性實(shí)驗(yàn),若加入內(nèi)標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)目的。
下列是公司正在銷售的產(chǎn)品:
2-Amino-N-(2-chloro-6-methylphenyl) thiazole-5-carboxamide  中文名:  分子式:C11H10ClN3OS  度:98.0%  小鼠Ⅰ型前膠原C末端肽(CCP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Dabigatran etexilate  中文名:  分子式:C34H41N7O5  度:98.0%  小鼠脫氧酚/脫氧啉(DPD)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Ethyl 3-(3-amino-4-(methylamino)-N-(pyridin-2-yl)benzamido)propanoate  中文名:  分子式:C18H22N4O3  度:98.0%  小鼠交聯(lián)物(PY)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

N-(4-Cyanophenyl)glycine  中文名:  分子式:C9H8N2O2  度:98.0%  小鼠骨橋素(OPN)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

Methyl 1-[(2'-cyanobiphenyl-4-yl)methyl]-2-ethoxy-1H-benzimidazole-7-carboxylate  中文名:  分子式:C25H21N3O3  度:98.0%  小鼠Ⅰ型膠原C端肽elisa試劑盒   小鼠Ⅰ型膠原C端肽試劑盒   規(guī)格型號(hào):96T/48T   小鼠Ⅰ型膠原C端肽試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠Ⅰ型膠原C端肽試劑盒、小鼠Ⅰ型膠原C端肽eisa試劑盒   保存條件:2-8   保質(zhì)期:6個(gè)月。

103-79-7  Phenylacetone (exempt preparation)  1mg  Herba andrographisPCR鑒定試劑盒 

103-82-2  Phenylacetic Acid  10mg  Herba andrographisPCR鑒定試劑盒 

103-82-2  Phenylacetic Acid  50mg  Squama manis穿山甲PCR鑒定試劑盒 

1038395-65-1  KX2-391 dihydrochloride  10mg  Radix cyathulae川牛膝PCR鑒定試劑盒 

1038395-65-1  KX2-391 dihydrochloride  10mM(in1mLDMSO)  Radix cyathulae川牛膝PCR鑒定試劑盒
禽腎炎病毒型PCR檢測(cè)試劑盒10141-51-2  CP 24,879 (hydrochloride)  1mg  Folium mori桑葉染料法PCR鑒定試劑盒 

10141-51-2  CP 24,879 (hydrochloride)  5mg  Folium mori桑葉染料法PCR鑒定試劑盒 

10141-51-2  CP 24,879 (hydrochloride)  10mg  Fructus mori桑椹染料法PCR鑒定試劑盒 

10141-51-2  CP 24,879 (hydrochloride)  50mg  Fructus mori桑椹染料法PCR鑒定試劑盒 

10144-66-8  H-Ala-p-nitrobenzyl ester . HBr  5g  Herba taxilli桑寄生染料法PCR鑒定試劑盒
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4。
2.
設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3.
樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。
4.
除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37
水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.
棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
6.
每孔加入底物A、B50μL,37
避光孵育15min產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)
7.
每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

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