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副雞禽桿菌PCR檢測試劑盒

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更新時間:2023-02-28 14:52:59瀏覽次數(shù):159

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產品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T
應用領域 化工 主要用途 僅供科研實驗
英文名稱 Avibacterium paragallinarumPCR 規(guī)格 50T
副雞禽桿菌PCR檢測試劑盒公司正在銷售的產品:分枝桿菌屬通用PCR檢測試劑盒
斯氏分枝桿菌PCR檢測試劑盒
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詳細介紹

實時熒光定量PCR
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因此,實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的:
1
Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進入真正的指數(shù)擴增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增,得到的Ct值是恒定的。
2
Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,重現(xiàn)性定量方法,已得到,廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。

4.png

操作流程
收集基因信息——>設計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產物 ——> 用感受態(tài)細胞做轉化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質粒抽提——>質粒測序——>測序結果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質粒實物保存。

產品名稱

英文名稱

規(guī)格

副雞禽桿菌PCR檢測試劑盒

Avibacterium paragallinarumPCR

50T

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PCR實驗方法步驟:
方法
1
:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix
2mM
4 μl    
引物110pM
2 μl    
引物210pM
2 μl     Taq
酶 (2U/μl
1 μl     DNA
模板(50ng-1μg/μl
1 μl      
ddH2O 50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2
:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93
預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93 40s → 58 30s → 72 60s,循環(huán)30-35次,在727min
3
:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產物放置于4
待電泳檢測或-20長期保存。
4
PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。

定量PCR方法:
a、競爭法  產品僅用于科研實驗
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內切酶消化PCR產物,競爭性模板的產物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產物分開,分別測定熒光強度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b
、內參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物,內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內標也被擴增。在PCR產物中,由于內標與靶模板的長度不同,二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內標為對照定量待檢測模板。
c
、PCRELISA
利用di高辛等標記引物,擴增產物被固相板上特異的探針所結合,再加入抗di高辛酶標抗體-辣根過氧化物酶結合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCRELISA法只是定性實驗,若加入內標,作出標準曲線,也可實現(xiàn)定量檢測目的。

操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4。
2.
設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL
3.
樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4.
除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37
水浴鍋或恒溫箱溫育60min
5.
棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6.
每孔加入底物A、B50μL37
避光孵育15min。
7.
每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

下列是公司正在銷售的產品:
3-(Hydroxymethyl)-3-nitro-1-(4-octylphenyl)-1,4-butanediol  899822-99-2  中文名:  分子式:C19H31NO5  度:98.0%  關鍵詞:    小鼠基質細胞衍生因子-1R   英文名稱:   somal-derived factor-1 R   規(guī)格:   48T/96T   英文縮寫:   SDF-1R

3-(Bromomethyl)-2-cyclopropyl-4-(4'-fluorophenyl)quinoline  154057-56-4  中文名:  分子式:C19H15BrFN  度:98.0%  關鍵詞:    小鼠可溶性E-選擇素   英文名稱:   soluble E-Selectin   規(guī)格:   48T/96T   英文縮寫:   sE-Selectin/sCD62E

3-(Boc-Amino)piperidine  309956-78-3  中文名:  分子式:C10H20N2O2  度:98.0%      小鼠可溶性L-選擇素   英文名稱:   soluble L-Selectin   規(guī)格:   48T/96T   英文縮寫:   sL-Selectin/sCD62L

3-(5-(2-Aminopropyl)-7-cyanoindolin-1-yl)propyl benzoate (2R,3R)-2,3-dihydroxysuccinate  239463-85-5  中文名:  分子式:C26H31N3O8  度:98.0%  關鍵詞:    小鼠基質細胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

3-(4-Chlorobutyl)indole-5-carbonitrile  143612-79-7  中文名:  分子式:C13H13ClN2  度:98.0%  關鍵詞:    小鼠基質裂解素(ST2)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

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